Diferența dintre AFLP și RFLP

Diferența cheie - AFLP vs RFLP

Studiile ADN au o imensă importanță în înțelegerea și determinarea relațiilor filogenetice, diagnosticarea bolilor genetice și cartografierea genomului organismului. Mai multe tehnici asociate analizei ADN sunt, de asemenea, utilizate pentru identificarea unei anumite gene sau a unei secvențe ADN într-un grup de ADN necunoscut. Ele sunt cunoscute ca markeri moleculari. Lungimea amplificată a fragmentelor de polimorfism (AFLP) și Restricție Lungimea Fragmentului Polimorfism (RFLP) sunt doi markeri moleculari (metode) dezvoltate în biologia moleculară pentru a detecta variațiile genetice între organisme. Ambele metode sunt la fel de importante și au avantaje și dezavantaje. Diferența cheie dintre AFLP și RFLP este aceea AFLP implică amplificarea selectivă a PCR a ADN-ului digerat în timp ce RFLP nu implică amplificarea selectivă a fragmentelor de ADN.

CUPRINS
1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Ce este AFLP
3. Ce este RFLP
4. Comparație între ele - AFLP vs. RFLP
5. rezumat

Ce este AFLP?

AFLP (polimorfismul lungimii fragmentelor amplificate) este un instrument important în biologia moleculară și este folosit în mod extensiv în analiza variațiilor genetice. AFLP se bazează pe amplificarea PCR specifică a ADN-ului genomic fragmentat și pe detectarea polimorfismului prin autoradiografe prin electroforeză în gel. AFLP contribuie larg la identificarea diferențelor genetice în tulpini sau specii strâns legate de diferite regate, inclusiv plante, animale, bacterii și ciuperci. AFLP poate fi efectuată cu cantități mici de probe ADN necunoscute. Nu necesită cunoștințe despre secvența anterioară și proiectarea de sonde.

Pașii AFLP

Izolarea ADN-ului
Digestia ADN-ului cu endonucleaze de restricție
Ligarea fragmentelor ADN limitate cu adaptoare
Amplificarea selectivă a fragmentelor cu situsuri de restricție specifice
Separarea produselor PCR prin electroforeză în gel
Vizualizarea matricei de gel prin autoradiografie

AFLP este o metodă mai sensibilă și reproductibilă care poate fi utilizată în profilarea ADN a câtorva taxoni, inclusiv ciuperci, bacterii, plante și animale, fără cunoașterea prealabilă a secvențelor ADN. Ajută la identificarea unor diferențe ușoare în rândul indivizilor din populații datorită naturii sale foarte sensibile. AFLP este, de asemenea, important în cartografierea genomului, studii medico-legale, testarea părinților, genotipări etc..

Figura 01: AFLP

Ce este RFLP?

Restricția Lungimii fragmentelor Polimorfisme (RFLP) este o tehnică care este utilizată pentru a detecta variațiile genetice în secvențele ADN omoloage. Este prima metodă dezvoltată pentru profilarea ADN-ului. Organismele au amprente digitale unice sau profile ADN. RFLP servește ca un instrument important de analiză a variației dintre profilurile ADN ale organismelor intraspecifice sau strâns legate, deoarece secvențele omoloage au diferite situsuri de restricție (locații) care sunt unice pentru un anumit organism. Când ADN-ul omologic este digerat cu endonucleaze de restricție specifice, acesta va avea ca rezultat diferite profiluri ADN care sunt unice pentru fiecare individ. Prin urmare, principiul acestei metode este detectarea variațiilor genetice între organisme prin restrângerea ADN-ului omologic cu enzime de restricție specifice și analizarea polimorfismului lungimii fragmentului prin electroforeză pe gel și blotting. Modelele de blot sunt unice pentru fiecare organism și caracterizează genotipurile specifice.

Etapele RFLP

Izolarea cantității suficiente de ADN din probe
Fragmentarea probelor de ADN cu endonucleaze de restricție specifice în secvență scurtă
Separarea fragmentelor rezultate cu lungimi diferite prin electroforeză pe gel de agaroză.
Transferul profilului de gel într-o membrană prin Southern blotting
Hibridizarea membranei cu sonde marcate și analiza polimorfismului lungimii fragmentului în fiecare profil

RFLP este o tehnică foarte importantă în detectarea moștenirii bolilor și găsirea riscului apariției bolii în rândul membrilor familiei. RFLP este, de asemenea, utilizat frecvent în cartografierea genomului, identificarea infractorilor în criminalistică, testarea paternității etc. RFLP are și câteva limitări. RFLP necesită cunoașterea prealabilă a datelor de secvență pentru a proiecta sonde pentru hibridizare. De asemenea, necesită izolarea cantității suficiente de ADN din probă pentru analiză, ceea ce este dificil în studiile medico-legale.

Figura 01: Cartografierea RRFLP

Care este diferența dintre AFLP și RFLP?

ALFP vs RFLP
AFLP implică amplificarea selectivă a ADN-ului digerat.	RFLP nu implică PCR decât dacă este PCR-RFLP.
Cunoștințe secvențiale
Nu este necesară cunoașterea secvenței anterioare.	Cunoașterea secvenței anterioare este necesară pentru sondele proiectate RFLP.
Fiabilitate
Acest lucru este mai sigur.	Acest lucru este mai puțin fiabil în comparație cu AFLP.
Eficiența în detectarea polimorfismului
Aceasta are o eficiență mai mare în detectarea polimorfismului decât RFLP.	Acest lucru este mai puțin eficient în comparație cu AFLP.
Cost
Acesta este un pic mai scump comparativ cu RFLP.	Acest lucru este mai puțin costisitor în comparație cu AFLP.
Aplicații
AFLP-urile au fost aplicate pentru cartografierea genomului, amprentarea ADN-ului, studiile privind diversitatea genetică, testarea paternității și medicina legală	Analiza RFLP este un instrument important în cartografierea genomului, localizarea genelor pentru tulburări genetice, determinarea riscului de îmbolnăvire și testarea paternității.

Rezumat - AFLP vs RFLP

AFLP și RFLP sunt două tehnici utilizate ca markeri genetici pentru evaluarea diversității și evaluarea relațiilor genetice în biologia moleculară. AFLP servește ca o metodă eficientă și sensibilă pentru detectarea polimorfismului genetic între organisme decât RFLP. Cu toate acestea, deși ambele metode au eficacități diferite în detectarea variațiilor genetice, ele sunt încă folosite pentru amprentarea ADN-ului și diagnosticarea bolii.

Referinţă:
„1. Garcia, Antonio A. F., Luciana L. Benchimol, Antonia M. Barbosa, Isaias O. Geraldi, Souza Jr. Cláudio L. și Anete P. De Souza. "Compararea markerilor RAPD, RFLP, AFLP și SSR pentru studii de diversitate în linii consangvinizate de porumb tropical" Genetics and Biology Molecular. Sociedade Brasileira de Genética, 2004. Web. 19 martie 2017
2. "Polimorfism de lungime a fragmentelor de restricție (RFLP)". Centrul Național de Informare Biotehnologică. Biblioteca Națională de Medicină din S.U.A., n.d. Web. 19 martie 2017
3. Masiga D. K. și Turner C. M. (2004). "Analiza polimorfismului de lungime a fragmentului amplificat (AFLP)". Metode Mol Biol: 270: 173-86. NCBI. Web. 19 martie 2017

Datorită fotografiei:
1. "ALFP" de la Barbarossa la Wikipedia olandeză - Transferat de la nl.wikipedia la Commons. (Domeniul Public) prin Commons Wikimedia
2. "Cartografierea RFLP" Prin Commons Wikimedia

Biologie