Diferența dintre clonare și subclonare

Diferența cheie - clonarea vs. subclonarea

Clonarea și subclonarea sunt proceduri biologice moleculare care creează celule sau organisme identice genetic care poartă ADN-ul sau gena care prezintă interes. Clonarea este o tehnică care implică inserarea genei sau a ADN-ului interesat într-un vector, replicarea acestuia în cadrul unei bacterii gazdă și producerea de celule sau organisme care sunt copii exacte ale machiajului genetic. Subclonarea este o tehnică care implică inserarea genei de interes, care este deja inserată într-un vector, într-un vector secundar, replicarea acesteia în cadrul unei bacterii gazdă și producerea de copii identice genetic ale celulelor sau organismelor. Diferența cheie între clonare și subclonare este aceea, în clonare, gena de interes, o dată legată într-un vector, continuă procesul de donare, în timp ce în subclonare gena deja clonată de interes este separată de vectorul părinte și introdusă din nou într-un vector de receptor și continuă procesul.

CUPRINS
1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Ce este clonarea
3. Ce este Subclonarea
4. Comparație de la o parte la alta - Clonarea vs Subclonarea
5. rezumat

Ce este clonarea?

Clonarea este procedura care produce organisme sau celule identice genetic. În natură, clonarea se întâmplă în mijloacele de reproducere asexuată. Atunci când nu există recombinare sau alterare genetică, celulele fiice primesc același machiaj genetic al părintelui. Organismele procariote și eucariote creează clone prin fisiune binară, înmugurire, mitoză etc. În biologia moleculară, genele de clonare sau fragmentele specifice ale ADN-ului sunt o metodă populară pentru a studia structura și funcția respectivei secțiuni ADN.

Obiectivul principal al clonării moleculare este de a face milioane de exemplare de celule sau organisme identice genetic care poartă fragmentul de ADN de interes (în principal, de gene). Creează organisme cu copii exacte genetice ale altui. Primar, genele specifice sunt clonate în studii moleculare pentru a obține informații structurale și funcționale și pentru secvențierea ADN-ului. De asemenea, pentru producerea de proteine specifice sau produse la scară largă, clonarea este larg utilizată.

Procedura de clonare

Pașii de bază ai procedurii de clonare sunt după cum urmează.

Identificarea și izolarea genei de interes. (Amplificarea genei de interes prin PCR).
Restrângerea digestiei genei de interes (Endonucleaza de restricție a tăiat gena).
Restrângerea digestiei vectorului ADN. (ADN-ul Vector este de asemenea tăiat utilizând aceeași endonuclează de restricție).
Inserarea genei în vector și formarea moleculei recombinante.
Transformarea vectorului recombinant într-o bacterie gazdă.
Izolarea și identificarea bacteriilor transformate (vectorul plasmidic trebuie să conțină o genă selectabilă, cel mai frecvent o genă de rezistență la antibiotice pentru a examina bacteriile transformate).
Expresia genei recombinante în cadrul gazdei.

Figura_01: Procedura de clonare

Ce este Subclonarea?

Subclonarea este o procedură de mutare a unei gene de interes de la un vector la altul pentru a vedea expresia genei pentru a obține funcționalitatea dorită a genei. În această metodă sunt implicați doi vectori; și anume vectorul părinte și vectorul de destinație. Inserțiile clonate sunt mutate din nou într-un al doilea vector în subclonare. Obiectivul transferului genei de la primul vector la cel de-al doilea vector este de a obține ceva ce nu ar putea fi făcut de primul vector sau de a separa din nou o genă în fragmentul deja clonat al ADN-ului și-l exprima singur. Enzimele de restricție sunt utilizate în această procedură la început.

Procedura de subclonare

Pașii de bază ai subclonării sunt după cum urmează.

Cu ajutorul endonucleazelor de restricție, separarea ADN-ului de interes în plasmidul donor (vectorul inițial).
Amplificarea ADN-ului prin PCR.
Purificarea produsului PCR (ADN de interes) prin electroforeză pe gel.
Deschiderea plasmidului receptor cu aceleași endonucleaze de restricție utilizate pentru a separa ADN-ul de interes în plasmida părinte.
Ligarea ADN-ului de interes (gena) în plasmidul receptor pentru a crea plasmidul subclonat.
Transformarea vectorului subclonat într-o bacterie gazdă competentă.
Screeningul celulelor transformate.
Purificarea ADN-ului plasmidic și utilizarea pentru secvențierea ADN-ului sau exprimarea genelor pentru obținerea produselor dorite.

Subclonarea se realizează în momente de izolare a unei gene din grupul de gene clonate sau atunci când gena de interes este necesară pentru a se transfera într-o plasmidă utilă pentru a vedea funcția exactă a genei de interes.

Figura_02: Procedura de subclonare

Care este diferența dintre clonare și subclonare?

Clonarea vs Subclonarea
Clonarea este procedura care produce organisme sau celule identice genetic.	Subclonarea este o procedură de mutare a unei gene de interes de la un vector la altul pentru a vedea expresia genei pentru a obține funcționalitatea dorită a genei.
Proces
Separați ADN-ul de interes din organism și inserați într-un vector odată clonat	ADN-ul clonat deja este separat de primul vector și inserat într-un al doilea vector și clonat.
Inserați mișcarea prin vectori
Nu se mișcă inserturile (ADN-ul de interes) de la un vector la altul.	Mutați inserțiile de la vectorul părinte la vectorul de destinație.

Rezumat - Clonarea vs Subclonarea

Clonarea creează celule sau organisme identice genetic cu gena inserată sau ADN-ul de interes. Ea continuă prin separarea și inserarea ADN-ului de interes într-un vector și o expresie în cadrul unei bacterii gazdă. Subclonarea împărtășește pași asemănători cu clonarea. Cu toate acestea, în subclonarea, fragmentul ADN deja clonat (gena de interes) este inserat într-un vector și transformat într-o bacterie gazdă. Aceasta este diferența cheie între clonare și subclonare.

Referințe

Lodish, Harvey. "Clonarea ADN-ului cu vectori plasmidici" Biologie celulară moleculară. Ediția a 4-a. Biblioteca Națională de Medicină din S.U.A., 01 ianuarie 1970. Web. 05 martie 2017
„Subclonarea.“ Wikipedia. Wikimedia Foundation, 14 februarie 2017. Web. 06 martie 2017
Subclonarea. Subclonarea Articole cu acces liber | Deschidere reviste de acces Conferințe Editori | Autori | Referenți evenimente științifice. N.p., n.d. Web. 06 martie 2017
Wackerhage, Henning. "Cum se subclonează". Cum se subclonează. N.p., 01 ianuarie 1970. Web. 06 martie 2017

Image Courtesy

Procedura de clonare moleculară - de către CNX OpenStax [CC BY 4.0], prin intermediul Wikimedia Commons
Procedura de subclonare - De Încărcătorul original a fost Takometer la Wikipedia în engleză (Transferat de la en.wikipedia la Commons.) [CC BY 2.5], prin intermediul Wikimedia Commons

Biologie