Diferența între tripsinizarea caldă și cea rece

Diferența cheie - Warm vs Rece tripsinizare

Căldura și călcarea tripsinizată sunt două metode utilizate în dezagregarea enzimatică a celulelor în cultivarea celulelor animale. diferența cheie între tripsinizarea caldă și rece, așa cum sugerează și numele, depinde de temperatura la care tripsina este adăugată pentru dezagregarea celulară. În cazul temperaturilor mai înalte (36.5 - 37 ⁰C) în timp ce tripsinizarea rece are loc în condiții de temperatură scăzută.

În timpul procesului de cultivare a celulelor primare de celule animale, există trei metode principale utilizate și s-au dovedit a fi de succes. Cele trei metode includ dezagregarea mecanică a celulelor, dezagregarea enzimatică a celulelor și tehnica explantului primar. Disagregarea enzimatică a celulelor care conduce la izolarea celulelor și se face de către tripsina enzimei de degradare a proteinei. Prin urmare, acest proces este cunoscut sub numele de tripsinizare. Trypsinizarea se poate face în două condiții diferite, și anume Trypsinizarea caldă și Trypsinizarea la rece. Călcarea tripsinizată este metoda de tratare a celulelor cu tripsină în condiții calde la o temperatură de 36,5 - 37 ° C ⁰C. Trypsinizarea rece este procesul de tratare cu tripsină care are loc în condiții mai reci, preferabil în gheață, menținând temperaturi foarte scăzute.

CUPRINS

1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Ce este Trypsinizarea caldă?
3. Ce este Trypsinizarea rece?
4. Asemănări între tripsinizarea caldă și rece
5. Comparație comparativă comparativă - Trypsinizarea caldă vs rece în formă tabulară
6. rezumat

Ce este Trypsinizarea caldă??

Trypsinizarea poate fi făcută pentru a dezagrega componentele celulare în scopul izolării celulelor pentru a produce o cultură celulară primară. Trypsina este o enzimă de degradare a proteinei, iar amestecul de enzime utilizat în tripsinizare poate fi fie un extract brut, fie un produs purificat. Se spune că extractul brut este mai eficient în liza proteinelor și dezintegrare celulară deoarece conține alte enzime degradante.

Încărcarea tripsinizată este cea mai frecvent utilizată metodă enzimatică pentru dezagregarea celulară care are loc în condiții de temperatură mai ridicată. Înainte de tratamentul prin tripsinizare, țesutul dorit este tăiat în bucăți mai mici. Facilitează procesul ușor de dezagregare. Țesutul tăiat este apoi spălat într-un mediu special cunoscut sub numele de mediul de disecție bazal de sare.

După finalizarea etapei de spălare, celulele sunt transformate într-un balon care conține enzima activă, care este tripsina. Deoarece această tehnică implică un protocol de tripsinizare caldă, tripsina este plasată la o temperatură de aproximativ 37 ° C ⁰C timp de aproximativ patru ore.

Figura 01: Trypsină

Conținutul este amestecat și agitat prin utilizarea metodelor de centrifugare pentru ușurința protocolului și pentru accelerarea procesului de dezagregare. Odată ce timpul recomandat este atins, celulele pot fi derivate din supernatant. Celulele derivate din supernatant sunt apoi incubate la o anumită temperatură și timp.

Ce este Trypsinizarea rece??

Trypsinizarea rece este celălalt tip de tripsinizare care are loc în condiții reci. În această tehnică, celulele tăiate și spălate sunt plasate în flacoane pe gheață și apoi înmuiate cu tripsină. Perioada de înmuiere este mult mai lungă - aproximativ 6 - 24 de ore.

După terminarea procedeului de înmuiere, tripsina este îndepărtată din lizatul celular, iar bucățile de țesut sunt incubate suplimentar la 37 ° C⁰C pentru aproximativ 20 - 30 de minute. Dezagregarea celulelor se realizează prin pipetarea repetată a amestecului de țesuturi. Aceasta va permite celulelor să disocieze de membrană și să vină la supernatant. Odată ce celulele sunt în supernatant, ele sunt incubate și crescute la o temperatură și perioadă de timp dorită.

Metoda de trypsinizare la rece are mai multe avantaje

Randamentul mai ridicat al celulelor viabile ca daune celulare este minimizat. Daunele celulare sunt minimizate prin faptul că nu se utilizează etapele de centrifugare.
Metoda extrem de convenabilă.
Mai puțin laborios.

Principala limitare a metodei de trypsinizare la rece este aceea că nu pot fi utilizate cantități mari într-o singură situație.

Care sunt asemănările dintre tripsinizarea caldă și cea rece??

Ambele procedee de tripsinizare la cald și la rece utilizează enzima tripsină pentru dezagregarea celulelor.
Ambele procese de tripsinizare caldă și rece sunt utilizate în procedurile de cultură celulară pentru dezagregarea celulelor.
În ambele procedee de tratare prin tripsinizare caldă și rece, celulele sunt derivate din supernatant.

Care este diferența dintre tripsinizarea caldă și cea rece??

Căldură vs. Trypsinizare rece
Călcarea tripsinizată este metoda de tratare a celulelor cu tripsină în condiții calde la o temperatură de 36,5 - 37 ° C ⁰.	Trypsinizarea rece este procesul de tratare cu tripsină care are loc în condiții mai reci, de preferință în gheață, menținând temperaturi foarte scăzute.
Protocol
Bucățile de țesut tăiate sunt menținute la 37 ° C ⁰C continuu pe tot parcursul procedurii.	Bucățile de țesut tăiate sunt menținute inițial la temperaturi scăzute de gheață și apoi menținute la 37 ° C ⁰.
Temperatura
Începerea procesului de tripsinizare la 36,5 - 37 ⁰	Trypsinizarea rece are loc la temperaturi scăzute de gheață.
Timpul consumat
Mai puțin timp necesar pentru întregul proces (aproximativ 4 ore) de tripsinizare caldă.	Timp mai lung de timp necesar (aproximativ 6 - 24 de ore) pentru trypsinizarea rece.
Randamentul celulelor viabile
Micșorat în tripsinizare caldă.	Ridicat în tripsinizare rece.
Utilizarea centrifugării
Este necesară centrifugarea pentru dezagregarea celulelor în tripsinizarea caldă.	Centrifugarea nu este necesară la tripsinizarea la rece.
Cantitatea inițială de țesut pentru tripsinizare
O cantitate mai mare de țesut poate fi utilizată în tripsinizarea caldă.	O cantitate mai mică de țesut poate fi utilizată în tripsinizarea rece.
Distrugerea celulelor
Înaltă datorită centrifugării în tripsinizarea caldă.	Mai puțin datorită trypsinizării reci.

rezumat - Warm vs Rece tripsinizare

Trypsinizarea este metoda utilizării tripsinei enzimei de degradare a proteinei pentru dezagregarea și prepararea culturilor celulare primare în timpul procesului de cultivare a celulelor. Există două tehnici principale de tripsinizare bazate pe temperaturile utilizate în timpul procedurii. Sunt tripsinizare caldă și rece. Începerea tripsinizării se face la 37 ° C ⁰C, în timp ce tripsinizarea rece se efectuează în condiții de gheață rece. Deși tripsinizarea rece durează mai mult timp pentru a fi finalizată, se spune că are un randament mai mare de celule viabile. Acest lucru se datorează faptului că distrugerea celulelor este minimizată în cazul tripsinizării la rece deoarece nu utilizează pași viguroși de centrifugare. Aceasta este diferența dintre tripsinizarea caldă și cea rece.

Referinţă:

1. "Trypsinizarea". Trypsinizarea - o prezentare generală Subiecte ScienceDirect. Disponibil aici
2. "Cultura celulară primară: 3 tehnici (cu diagrama)". Discuții despre biologie, 16 octombrie 2015. Disponibil aici

Datorită fotografiei:

1. "Site activ al tripsinei" Prin munca proprie, (CC BY-SA 3.0) prin intermediul Commons Wikimedia

Biologie celulara