Clonarea ADN este un proces important care permite propagarea fragmentelor importante de ADN ale organismelor. Aceasta necesită unificarea ADN-ului specific cu ADN vector pentru a crea ADN recombinant care se transformă în organismul gazdă. Un vector este o moleculă de ADN care se comportă ca un vehicul pentru a transporta material genetic străin într-o altă celulă sau organism. Acesta ar trebui să fie capabil să se replice în organismul gazdă și să producă copii multiple ale ADN-ului recombinant. Există diferite tipuri de vectori utilizați în clonarea ADN-ului. Cromozomul artificial din drojdie (YAC) și vectorul de fag M13 sunt două tipuri dintre acestea. Diferența cheie dintre vectorul de fag YAC și M13 este aceea YAC este un cromozom artificial care replică în celulele de drojdie in timp ce Vectorul de fag M13 este un ADN circular monocatenar al bacteriofagului M13 care replică în E coli celulele.
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Ce este YAC?
3. Ce este M13 Phage Vector
4. Comparație comparați între ele - Vectorul de fag YAC vs M13
5. rezumat
YAC este un cromozom construit artificial care are capacitatea de a transporta un segment mare de ADN străin și de a se replica în celulele de drojdie. Are centromere, telomere și secvențe replicatoare autonom, esențiale pentru replicare și stabilitate. YAC ar trebui să poarte, de asemenea, un marker selectiv sau markere și situsuri de restricție pentru a face un vector eficient de clonare. Secvențe mari cuprinse între 1000 kb și 2000 kb pot fi inserate în YAC și transferate în drojdie.
Figura 01: YAC Vector
Bacteriofagul M13 este un virus care infectează și replică în E coli. Genomul bacteriofagului M13 este de dimensiuni mici, de aproximativ 6,7 kb. Este un ADN cu sens unic, circular și pozitiv. Acest virus infectează în mod specific E coli bacterii prin F pilus. Odată ce intră în ssDNA în bacterie, sintetizează catena complementară și devine dsDNA sau forma replicativă (RF) a M13. RF se poate comporta ca o plasmidă în organismul gazdă. DsDNA replică în interiorul E coli și produce ssDNA care poartă fagi noi. Acești noi fagi sunt eliberați continuu din E coli fără a ucide celula gazdă. Cu toate acestea, infecția încetinește creșterea E Coli. ds ADN poate fi extras din celule bacteriene și utilizat ca vectori în clonarea ADN. Ei sunt cunoscuți ca vectori de fag M13. Acestea pot fi ușor manipulate și utilizate în mod similar vectorilor plasmidici.
Abilitatea inerentă a infecției acestor fagi M13 servește ca o bună calificare pentru a fi utilizată ca vector în clonarea genetică. Când se dezvoltă M13 într-un vector, mai multe elemente ar trebui să fie încorporate în genomul său. Acestea sunt, o gena pentru proteina lac represor (lac I), regiunea proximala a operatorului lac Z gena, un promotor lac și un situs de clonare multiplu (polilinker). Atunci când dsDNA al M13 este utilizat ca vectori, acesta poate fi tratat ca un vector plasmidic. Cu toate acestea, utilizarea ssDNA M13 are avantaje în secvențierea ADN și mutageneza direcționată pe situs.
Deoarece vectorul de fag M13 posedă mai multe site-uri de clonare în lacZ regiunea, vectorii recombinați pot fi identificați cu ușurință prin screening-ul coloniei albastru / alb pe plăcile de agar conținând IPTG și X-Gal. Placile albastre produse pe plăci nu conțin fagii recombinați. Prin urmare, fagii cu inserții pot fi selectați pentru scopul de clonare.
Figura 02: Bacteriofag M13
YAC vs M13 Vector fag | |
YAC este un cromozom modificat genetic, care are capacitatea de a transporta un segment mare de ADN străin și de a se reproduce în celulele de drojdie. | Vectorul de fag M13 este un vector viral dezvoltat de bacteriofagul M13 care se utilizează pentru a introduce ADN străin E coli. |
Scop | |
YAC-urile au fost concepute pentru a clona fragmente mari de ADN genomic în drojdie. | Vectorii de fag M13 sunt utilizați pentru a introduce ADN străin E coli. |
Introduceți lungimea | |
YAC-urile pot conține inserții genomice de mărimea megabazei (1000 kb - 2000 kb). | Dimensiunea inserțiilor este de aproximativ 1500 bps. |
Constructie | |
YAC ADN este dificil de purificat intact și necesită o concentrație ridicată pentru generarea sistemului YAC vector. | Apare prin lanțul de electroni fotosintetic ciclic. |
Stabilitate | |
YAC este instabilă. | Fagii M13 pot fi extrași cu ușurință. |
mărimea | |
Enzimele sunt molecule mai mari. | Fagii M13 sunt stabili decât YAC. |
YAC este un sistem vectorial construit artificial folosind o regiune specifică a cromozomului de drojdie pentru a introduce segmente mari de material genetic în celulele de drojdie. Vectorul de fag M13 este un sistem vector derivat din bacteriofagul M 13 care utilizează E coli ca organism gazdă. Aceasta este diferența principală dintre vectorul YAC și M13 Phage Vector. Ambele sunt la fel de utile în tehnologia ADN recombinant și în clonarea genelor.
Referinţă:
1. "Vector". Genetica-note - Vector. N.p., n.d. Web. 16 mai 2017. https://genetics-notes.wikispaces.com/Vector
2. "Cromozomul artificial dulce" Wikipedia. Wikimedia Foundation, 21 aprilie 2017. Web. 16 mai 2017. .
Datorită fotografiei:
1. "M13B" Prin J3D3 - Lucrare proprie (CC BY-SA 3.0) prin intermediul Commons Wikimedia