Diferența dintre benzonază și DNaza

Diferența cheie - benzonază față de DNaza

Degradarea acizilor nucleici este importantă pentru multe tehnici de biologie moleculară. Este utilizat pe scară largă în tehnologia ADN recombinant pentru a scăpa de fragmentele nedorite de ADN și ARN. Enzime de degradare a acidului nucleic sunt denumite Nucleaze și pot fi de diferite tipuri bazate pe funcția necesară. Nucleazele care degradează ADN-ul sunt cunoscute ca DNase, în timp ce cele care degradează ARN sunt RN-urile cunoscute. Aceste enzime sunt utilizate în cea mai mare parte în in vitro experimente unde în vitro teste moleculare sunt efectuate pentru a izola ADN-ul pur, ARN sau proteine. Benzonazele sunt un tip de nucleaze care degradează atît ADN-ul, cît și ARN-ul, în timp ce DNase-urile degradează numai ADN-ul. Aceasta este diferența cheie dintre Benzonază și DNaza.

CUPRINS

1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Ce este Benzonaza
3. Ce este DNaza
4. Asemănări între benzonază și DNaza
5. Comparație comparativă comparativă - Benzonază față de DNaza în formă tabulară
6. rezumat

Ce este Benzonaza?

Benzonaza este o endonuclează modificată genetic Serratia marcescens. Această enzimă este produsă în E coli găzduiește în scară industrială. Benzonaza este capabilă să scindeze ADN dublu catenar, ADN liniar, ADN circular și ARN monocatenar. Astfel, benzonaza este importantă din punct de vedere comercial. Enzima benzonază este un dimer proteic care are 245 aminoacizi identici, subunități de ~ 30 kDa cu două legături disulfidice esențiale. Benzonaza scindează acizi nucleici la capătul 5 'și are ca rezultat fragmente cu 5' capăt liber. Benzonaza poate scinda acizii nucleici în orice secvență, dar preferă regiunile bogate în GC.

Benzonaza este păstrată la -20 ° C ⁰C. S-a constatat că pH-ul optim pentru activitatea enzimatică este de 8,0 - 9,2. Aplicațiile benzonazei includ prepararea probelor pentru electroforeza gelului proteic 2D unde Benzonaza îndepărtează acizii nucleici legați și îndepărtează contaminanții de acid nucleic din preparate recombinante de proteine. Este, de asemenea, utilizat pentru a reduce vâscozitatea extractelor de proteine și a preveni aglomerarea celulelor într-un amestec celular.

Ce este DNaza?

DNaza este o nuclează, enzima hidrolitică, care este capabilă doar să scinde ADN dublu catenar. Există două tipuri principale de DNaze: DNaza I și DNaza II. DNaza I participă la scindarea ADN-ului dublu catenar pentru a produce polinucleotide cu capete libere 5 '. DNaza II este implicată în scindarea ADN-ului dublu catenar pentru a produce lanțuri de polinucleotide cu capete libere 3 'sau console.

DNaza I

DNaza I funcționează la un pH optim între 7,0 - 8,0. Activitatea enzimei depinde de mulți cofactori ionici care includ Ca²⁺, mg²⁺ sau Mn²⁺. Activitatea lui Mg²⁺ și Mn²⁺ decide funcția de DNaza I. În prezența Mg²⁺, DNaza I scindează fiecare catenă de ADNc independent. Aceasta are loc în mod aleatoriu. În contrast, în prezența Mn^2+, enzima scindează ambele catene ADN la aproximativ același loc. Această scindare va duce la producerea a două tipuri de fragmente de ADN; un tip cu capete bont și un alt tip cu una sau două console de nucleotide.

Figura 02: DNaza

DNaza II

DNaza II funcționează la un pH optim de 4,5-5,0, iar ionii metalici divalenți sunt necesari pentru activitatea sa, similară cu cea a deoxiribonucleazei DNase I. Mecanismul de dezinfecție II este cunoscut a fi compus din trei etape principale.

Mai multe pauze de catenă unică sunt induse în cadrul coloanei vertebrale a ADN-ului.
Se produc nucleotide solubile în acid și oligonucleotide.
Transformarea hiperchromică non-liniară are loc în ultima fază.

Principalii inhibitori ai enzimei de DNază includ chelatori de metal, metale de tranziție și substanțe chimice cum ar fi dodecil sulfat de sodiu și β-mercaptoetanol.

Principalele aplicații ale DN2zei includ prepararea de extracte ARN libere de ADN și extracte de proteine și îndepărtarea ADN-ului matriței în timpul experimentelor transcripției in vitro.

Care sunt asemănările dintre benzonază și DNaza?

Ambele sunt enzime hidrolitice.
Ambele sunt nucleaze.
Ambele participă prin scindarea legăturilor fosfodiestere ale acizilor nucleici.
Ambele necesită un pH optim și temperaturi de depozitare pentru a menține activitatea enzimei.
Inhibitorii enzimelor includ agenți de chelare, metale de tranziție și substanțe chimice de detergent.
Aplicațiile se concentrează în principal pe obținerea de extracte cu puritate ridicată de ADN, ARN și proteine.
Ambele enzime pot fi produse prin inginerie genetică.

Care este diferența dintre benzonază și DNaza?

Benzonază față de DNaza
Benzonaza este o enzimă capabilă să scindeze ADN dublu catenar, ADN liniar, ADN circular și ARN.	DNaza este o enzimă capabilă să scindeze ADN dublu catenar.
Substrat pentru enzime
Atât ADN cât și ARN sunt substraturi pentru benzonază.	ADN-ul este substratul pentru DNaza.
Structura
Gama optimă de pH a benzonazei este de 7,0 - 8,0	Domeniile optime de pH ale DNase I sunt 7,0 - 8,0, iar DNaza II este 4,5 - 5,0.

Rezumat - Benzonaza vs DNaza

Enzimele nuclease sunt utilizate pe scară largă în diferite procedee experimentale în ceea ce privește biologia moleculară și ingineria genetică. Benzonaza și DNaza sunt două tipuri de nucleaze. Benzonaza este implicată în degradarea atât a ADN-ului, cât și a ARN-ului, în timp ce ADN-ul este implicat în scindarea ADN-ului dublu catenar. Aceasta este diferența de bază dintre benzonază și DNaza. În prezent, ambele tipuri de nucleaze sunt produse prin tehnologie ADN recombinant care produce o enzimă de calitate superioară optimizată pentru o producție maximă.

Descărcați versiunea PDF a benzonazei față de DNaza

Puteți descărca versiunea PDF a acestui articol și o puteți utiliza în scopuri offline conform notei de citare. Descărcați versiunea PDF aici Diferența dintre benzonază și DNaza

Referințe:

1. "Deoxiribonucleaza I din pancreasul bovin D5025" Sigma-Aldrich, Disponibil aici. Accesat la 19 septembrie 2017.
2. "Deoxiribonucleaza II." Deoxyribonucleaza II - Manual de Enzyme Worthington, Disponibil aici. Accesat la 19 septembrie 2017.

Datorită fotografiei:

1. "Site de hipersensibilitate a ADN-ului" de Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. - Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, și colab. (2012) Corelația între distribuția hipersensibilă a situsului de DNAS I și expresia genică în celule HeLa S3. PLoS ONE 7 (8): e42414. doi: 10.1371 / journal.pone.0042414 (CC BY-SA 2.5) prin intermediul Commons Wikimedia

Biologie moleculara