Reacția în lanț a polimerazei (PCR) este o metodă de amplificare a ADN care este utilizată în aplicațiile biologice moleculare. Este o tehnică frecvent utilizată care face milioane de miliarde de exemplare ale unei secvențe de ADN foarte interesate. Este un in vitro metoda efectuată în laboratoare. Tehnica PCR este total dependentă de polimeraza ADN produsă comercial, numită Taq polimerază. Și, de asemenea, necesită mai multe componente și o întreținere corespunzătoare a temperaturii. O componentă importantă este primerii. Primerii sunt secvențele de ADN scurte special concepute pentru secvența ADN țintă. Acestea sunt de obicei în lungime de aproximativ 20 de nucleotide. Taq polimeraza catalizează adăugarea de nucleotide în secvența nucleotidică preexistentă. Prin urmare, primerii sunt serviți ca puncte de plecare ale sintezei de noi componente. Taq polimeraza funcționează numai în direcția 5 'până la 3', de unde sinteza ADN are loc în aceeași direcție 5 'la 3'. Deoarece ADN-ul este dublu catenar, sunt necesare două tipuri de primeri în PCR. Acestea sunt cunoscute ca grunduri directe și grund invers. Marcatorii forward și invers sunt numiți pe baza direcției de alungire a primerului în ADN când are loc sinteza ADN. Annelele anterioare cu anemie ADN antisens și inițiază sinteza catenei + ve a genei în direcția 5 'la 3'. Anneul invers al primerului cu catena de sens și inițiază sinteza benzii complementare a catenei de codare; care este -trandul genei in directia 5'-3 '. Acesta este diferența cheie între grunduri înainte și invers.
1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Ce este un Grund Forward
3. Ce este un grund invers
4. Asemănări între grundul înainte și înapoi
5. Comparație comparație comparativă - primă inversă față în față în formă tabulară
6. rezumat
Orientarea spre înainte este sinteza catenei de codificare sau a catenei sensibile a unei gene. Taq polimeraza catalizează sinteza unei noi fire în direcția 5 'la 3'. Sinteza catenei de codare are loc atunci când primerul se annează cu non-codarea sau cu catena antisens și se alungează în direcția 5 'la 3'.
Figura 01: Grunduire înainte și înapoi
Primerul care se annează cu catena antisens sau cu catena necodificată sau cu șablonul de șablon este cunoscut ca primer înainte, deoarece primerul anterior acționează ca punct de plecare pentru sinteza codării sau a catenei pozitive a genei. Amortizorul înainte are o secvență nucleotidică scurtă, care este complementară capătului 3 'de flancare a benzii antisens. Acesta hibridizează cu catena antisens și facilitează polimeraza Taq pentru a adăuga nucleotide care sunt complementare lanțului șablon.
Anticorpul invers este secvența scurtă de ADN care se reia cu capătul 3 'al firei sensului sau a firului de codare. Reverse primerul servește ca punct de plecare pentru a sintetiza o catenă complementară a secvenței de codare sau a secvenței de necodificare. Grundul invers este proiectat complementar cu capătul 3 'al benzii de codificare. Prin urmare, acesta se annează cu capătul 3 'de flancare al catenei de codificare și permite polimerazei Taq să sintetizeze firul antisens sau firul de șablon. Deoarece orientarea sa este într-o manieră inversă, acest primer este etichetat drept primer reversibil.
Atât primii inversi, cât și cei din față sunt importanți pentru producerea a milioane de miliarde de copii ale anumitor regiuni ale ADN-ului care sunt vizate sau interesate.
Forward Primer vs Reverse Primer | |
Inițiatorul înainte este secvența scurtă de ADN care hibridizează cu capătul 3 'al codului necodificator sau șablonul de șablon al genei și servește ca punct de plecare pentru sintetizarea secvenței de codificare. | Reverse primer este secvența scurtă de ADN care hibridizează cu capătul 3 'al codificării sau a catenei nontemplate și servește drept punct de plecare pentru sintetizarea secvenței necodificatoare. |
Stratul de recoacere | |
Annele de amorsare anterioare cu șir de șablon. | Annele de anvergură inversă cu tijă nontemplate. |
Rezultă o nouă secvență | |
Grundul înainte facilitează sinteza secvenței de codificare. | Reverse primerul facilitează sinteza secvenței necodificate. |
Există două tipuri de primeri implicați în tehnica PCR. Sunt primeri inversi și inversi. Bazându-se pe alungirea primerului în noua sinteză a catenei ADN, acești primeri sunt marcați sau numiți. Taq polimeraza sintetizează ADN nou în orientarea de la 5 'la 3'. Prin urmare, primerii sunt proiectați ca fiind complementari la capetele 3 'ale dublelor fire. Amortizorul care se extinde în direcția 5 'până la 3' hibridizează cu capătul 3 'al antisensului sau șablonul sau secvența necodificată. Acesta servește drept punct de plecare pentru sintetizarea secvenței de codificare. Grundul invers care se leagă în direcția 5 'până la 3' hibridizează cu capătul 3 'al codificării sau nontemplatei sau a firului sens. Acesta servește drept punct de plecare pentru sintetizarea secvenței de necodificare. Aceasta este diferența dintre grundul înainte și cel invers.
1. "Primer (biologie moleculară)" Wikipedia, Fundația Wikimedia, 20 februarie 2018. Disponibil aici
2. "Reacția în lanț a polimerazei (PCR)". Academia Khan. Disponibil aici
1.Primers RevComp Melted2' By Richard Wheeler (Zephyris) - Muncă proprie, (CC BY-SA 3.0) prin intermediul Commons Wikimedia