Diferența dintre traducerea Nick și Extensia Primer

Diferența cheie - Traducere Nick vs. Extensie primar
 

Traducerea și extinderea primerului sunt două tehnici importante efectuate în biologia moleculară. Diferența cheie dintre traducerea nick și extinderea primerului este aceea procesul de traducere nick produce sonde marcate pentru alte tehnici de hibridizare in timp ce metoda de extensie a primerului identifică o secvență ARN specifică dintr-un amestec și prezintă informații despre exprimarea ARNm. Ambele tehnici au o mare importanță și sunt efectuate în mod obișnuit în laboratoarele de cercetare moleculară.

CUPRINS
1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Ce este traducerea Nick
3. Ce este Extensia Primer
4. Comparație comparativă - Traducere Nick vs. Extensie Primer
5. rezumat

Ce este traducerea Nick?

Traducerea cu transcripție cu tantru este o tehnică importantă utilizată pentru a prepara sonde etichetate pentru diferite tehnici moleculare biologice, cum ar fi blotting-ul, in situ hibridizare, fluorescentă in situ hibridizare etc. Este un in vitro metoda de etichetare a ADN-ului. Sondele ADN sunt utilizate pentru a identifica secvențe ADN sau ARN specifice. Cu ajutorul unei sonde marcate, fragmente specifice pot fi marcate sau vizualizate dintr-un amestec complex de acid nucleic. Prin urmare, sondele etichetate sunt preparate folosind diferite tehnici pentru a fi utilizate pentru diferite tehnici. Traducerea cu nick este o astfel de metodă care produce sonde marcate cu ajutorul enzimei DNase 1 și ADN polimerază 1.

Procesul de translație nicăieri începe cu activitatea enzimei de DNază 1. DNaza 1 introduce nicks în coloana vertebrală a fosfatului de ADN dublu catenar prin scindarea legăturilor fosfodiesterice între nucleotide. Odată ce porecla este creată, se va produce o grupare 3'OH liberă a nucleotidei și va acționa enzima ADN polimerază 1. Activitatea 5 'la 3' a exonucleazei ADN-polimerazei 1 îndepărtează nucleotidele din picior în direcția 3 'a lanțului ADN. În același timp, activitatea polimerazică a enzimei ADN polimerază 1 funcționează și adaugă nucleotide pentru a înlocui nucleotidele îndepărtate. Dacă nucleotidele au fost marcate, înlocuirea va avea loc cu nucleotidele marcate și va marca ADN-ul pentru identificare. Acest ADN marcat recent sintetizat poate fi utilizat ca probă în diferite reacții de hibridizare în Molecular Biology.

Figura 01: Procesul de traducere a lui Nick

Ce este Extensia Primer?

Extensia primerilor este o tehnică care se utilizează pentru a găsi secvența ARN specifică dintr-un amestec de ARN și a localiza capătul 5 'al transcripției mRNA. Este, de asemenea, utilizat pentru a studia structura ARN și expresia. Metoda de extindere a primerului se efectuează cu primeri marcați sau cu nucleotide marcate. Dacă se utilizează primeri marcați, aceasta exclude necesitatea de etichetare a nucleotidelor care sunt utilizate pentru sinteza ADNc. Există mai mulți pași în această tehnică. Se începe prin extragerea ARN din probă. Apoi, la amestec se adaugă un primer oligonucleotidic marcat împreună cu ingredientele necesare pentru a sintetiza ADNc al unei secvențe ARN specifice. Primer anneals cu secvența complementară din amestec. Folosind secvența de recoacere a primerului ca matriță, enzima revers transcriptază sintetizează ADN-ul complementar (ADNc) al secvenței ARN. Annealingul cu primer și transcripția inversă apar doar atunci când secvența ARN specifică este prezentă în eșantion. În final, atunci când se efectuează electroforeza gelului de denaturare, se poate determina mărimea secvenței ARN. De asemenea, este ușor să găsiți baza +1 a situsului mARN (situs de inițiere a transcripției) prin metoda de extindere a primerului. Cantitatea de mRNA prezentă în probă poate fi cuantificată prin această metodă dacă se utilizează un primer în exces.

Figura 02: Extensie de grund

Care este diferența dintre Traducerea Nick și Extensia Primer?

Traducerea Nick vs. Extensia Primer
Traducerea cu nick este un proces care creează sonde ADN marcate pentru diferite reacții de hibridizare.	Extensia de bază este o tehnică utilizată pentru a găsi ARN specific sau pentru a studia expresia genelor.
Enzime utilizate
Se utilizează enzime de DNAză 1 și enzime ADN polimerază.	Se utilizează enzima revers transcriptază.
Importanţă
Traducerea de la Nick facilitează marcarea unei secvențe ADN specifice.	Extensia primerului permite detectarea mărimii secvenței mARN specifice și a cantității prezente în probă.

Rezumat - Traducere Nick vs. Primer Extension

Traducerea cu nick este o metodă folosită pentru a sintetiza sonde marcate pe baza activităților de DNaza 1 și E coli ADN polimeraza 1 enzime. Este un in vitro metoda folosită în laboratoare înainte de diferite tehnici de hibridizare. În timpul traducerii nick, activitatea exonucleazei 5'-3 'a ADN polimerazei 1 îndepărtează nucleotidele înainte de activitatea nick și polimerază a ADN polimerazei 1 înlocuind nucleotidele îndepărtate cu nucleotide marcate în spatele nickului. Extensia primerilor este o metodă care se utilizează pentru a detecta un transcript specific al ARN dintr-un amestec și pentru a cuantifica dimensiunea și cantitatea de ARN de interes. Aceasta este diferența dintre traducerea nick și extinderea primerului.

Referințe
1. Reid, Alex. "Traducere de Nick" Springer. N.p., n.d. Web. 18 aprilie 2017
2. "Extensie de grunduri". N.p., n.d. Web. 19 aprilie 2017
3. Kuo, M. T. și W. Plunkett. "Nick-traducere a cromozomilor metafază: etichetarea in vitro a regiunilor de hipersensibilitate nucleoză în cromozomi". Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Biblioteca Națională de Medicină din S.U.A., februarie 1985. Web. 19 aprilie 2017
4. Raymond și colab. "Examenul simplu, cantitativ de extensie a primerului PCR pentru monitorizarea directă a micro ARN-urilor și a ARN-urilor cu interferență scurtă". Copyright 2005 de către RNA Society, noiembrie 2005. Web. 19 aprilie 2017

Datorită fotografiei:
1. "Examinarea Extensiei Primer" De Jjnmmnjj - Lucrare proprie (CC BY-SA 3.0) prin intermediul Commons Wikimedia