Diferența dintre fuziune și polimerază Taq

Diferența cheie - Phusion vs. Taq Polymerase

ADN-polimerazele sunt enzimele utilizate pe scară largă în tehnicile de biologie moleculară și sunt de asemenea prezente în mod natural în toate organismele care se supun replicării ADN-ului. Ele sunt enzimele cheie de polimerizare care implică în timpul replicării. ADN polimeraza este capabilă de adăugarea de nucleotide la capătul 3 'liber al catenei ADN, provocând astfel extinderea unei noi catene. În prezent, datorită dezvoltării biologiei moleculare în diagnosticarea bolilor și în aplicațiile industriale, este important să se producă polimeraze având diferite proprietăți benefice. Aceasta crește precizia metodei și o face o tehnică mai rapidă. Phusion și Taq polimeraza sunt două enzime polimeraze termostabile produse în comerț care sunt utilizate în aplicații moleculare speciale. Phusion este o ADN polimerază izolată din Pyrococcus furiosus și este utilizat în principal în experimentele de clonare pentru a crește fidelitatea. Taq ADN polimeraza este polimeraza ADN standard utilizată în reacția de polimerizare a lanțului (PCR) și este izolată din bacteria termostabilă; Thermus aquaticus. diferența cheie între cele două enzime este microorganismul sursă. Fusion este izolat de extremofil, Pyrococcus furiosus în timp ce polimeraza Taq este izolată de termofilă, Thermus aquaticus.

CUPRINS

1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Ce este Phusion
3. Ce este polimeraza Taq
4. Asemănări între fuziune și polimerază Taq
5. Comparație comparativă comparativă - Phusion vs Polymerase Taq în formă tabulară
6. rezumat

Ce este Phusion?

ADN polimeraza de polimerizare este o nouă polimerază care este produsă prin izolarea enzimei de la Pyrococcus furiosus, care este o Archaea extremofilă. Acești microbi se află în condiții de temperatură extrem de ridicată, ceea ce face ca polimeraza să fie o polimerază cu rezistență ridicată la căldură. Polimeraza polimerazică este utilizată pentru a obține fidelitate extremă față de polimeraza termostabilă convențională; Taq polimerază. Polimeraza de fuziune este capabilă să amplifice șabloane lungi de până la 7,5kb de ADN genomic. Capacitatea optimă de polimerizare a polimerazei de fuziune este la 72 ° C⁰C. Phusion este, de asemenea, utilizat în produsele de clonare pentru secvențierea, analiza expresiei și analiza mutației.

Analiza ADN-ului de fuziune are activitatea exonucleazei 3 '- 5'. Aceasta permite corectarea lanțului nou sintetizat după sinteză. Prin urmare, neconcordanțele nucleotidelor pot fi reparate cu ușurință. Astfel, are o rată de eroare mai mică. Avantajele generale ale polimerazei de fuziune sunt:

Extreme fidelitate
Viteză mare și timp de extindere redus
Reacții robuste și necesită o optimizare minimă
Randament ridicat

Figura 01: Soluție

Principalul dezavantaj al polimerazei de fuziune este că este inhibată în prezența deoxiuridinei trifosfatului (dUTP). Atunci când dUTP-urile sunt acumulate în amestecul de reacție, acestea pot inhiba acțiunea polimerazei de fuziune. Acest lucru este împiedicat prin tratarea amestecului de reacție cu dUTPază înainte de adăugarea enzimei. În prezent, o variantă rezistentă la dUTP a polimerazei de fuziune cunoscută sub numele de Pfu Turbo este utilizată în locul polimerazei Phusion ca remediu pentru această problemă.

Ce este polimeraza Taq?

Taq ADN polimeraza invenția a revoluționat domeniul biologiei moleculare. A rezolvat o problemă majoră în amplificarea ADN. Taq ADN polimeraza este o enzimă polimerază stabilă la căldură extrasă și izolată din bacteria termofilă, Thermus aquaticus. Descoperirea acestor enzime duce la dezvoltarea PCR. Această enzimă a permis utilizarea reacției în lanț a polimerazei în amplificarea ADN în locul tehnicilor convenționale de clonare laborioase. PCR este acum utilizat în domeniul diagnosticării moleculare, al câmpurilor agricole și industriale, cu numeroase noi variante adăugate tehnicii.

Figura 02: Polimeraza Taq

Taq DNA polimeraza funcționează la intervalul de temperatură optim între 72 ° C⁰C - 80⁰C. ADN polimeraza Taq necesită un co-factor; magneziu pentru funcția sa. Taq polimeraza nu are capacitatea de corectare 3 '- 5', prin urmare, rata de eroare a ADN-ului polimerazei Taq este ridicată în comparație cu mai multe tipuri de polimeraze ADN noi, cum ar fi poliuraza de fuziune, etc. Dar popularitatea Taq DNA polimerazei rămâne aceeași în întreaga lume a științei datorită confortului și flexibilității enzimei.

Care sunt asemănările dintre fuziune și Taq polimerază?

Ambele enzime de polimerază Phusion și Taq sunt enzimele de polimerizare care sunt capabile să adauge nucleotide la capătul 3 'liber al catenei ADN.
Ambele polimaze Phusion și Taq necesită o secvență de primer pentru inițierea polimerizării.
Ambele polimaze Phusion și Taq sunt stabile la căldură.
Ambele polimeraze Phusion și Taq sunt utilizate în mecanismele PCR pentru amplificarea ADN-ului.
Când se adaugă polimeraza la amestecul de reacție, ambele polimeraze Phusion și Taq sunt adăugate ultima pentru a asigura eficiența enzimei.
Ambele polimeraze Phusion și Taq sunt sintetizate comercial pentru scopuri experimentale în biologia moleculară.
Ambele polimaze de tip Phusion și Taq necesită un cofactor pentru a-și finaliza funcția.

Care este diferența dintre fuziune și polimerizare Taq?

Phusion vs. Taq Polymerase
Phusion este o ADN polimerază izolată din Pyrococcus furiosus și este utilizat în principal în experimentele de clonare pentru a crește fidelitatea.	Taq ADN polimeraza este polimeraza ADN standard utilizată în reacția de polimerizare a lanțului (PCR) și este izolată din bacteria termostabilă, Thermus aquaticus.
Organismul de Sursă
Phusion este extrasă din arhaea extremofilă - Pyrococcus furiosus.	Aceste lucrări literare se întind de la perioada colonizării până la perioada de decolonizare.
Capacitatea de citire a probelor
3 '- 5' capacitatea de citire dovada este prezentă în Phusion.	Capacitatea de citire a probei 3 '- 5' este absentă în polimeraza Taq.
Fidelitate
Înalta fidelitate este acolo cu Phusion.	Taq polimeraza prezintă o fidelitate redusă.
Amplificare
Phusion este capabil să amplifice fragmente lungi de ADN.	Taq polimeraza este capabilă să amplifice fragmente de ADN mult mai scurte.
dutp otrăvire
Fuziunea este inhibată de acumularea ciudată.	Taq polimeraza nu este inhibată de dUPT.

rezumat - Phusion vs Taq polimerază

Phusion și Taq ADN polimeraza sunt două polimeraze stabile la căldură care sunt utilizate în tehnicile PCR. Phusion este o polimerază izolată de extremofile, Pyrococcus furiosus în timp ce Taq este izolat de bacteriile termostabile Thermus aquaticus. Descoperirea ADN polimerazei Taq conduce la invenția PCR. Phusion are multe avantaje față de Taq care a făcut din Phusion o opțiune mai bună în producerea de ADN de înaltă fidelitate. Totuși, polimeraza Taq este încă utilizată ca enzima standard de polimerază în PCR. Aceasta este diferența dintre polimeraza Phusion și Taq.

Referinţă:

1.Biolabs, New England. "Polymerase ADN Taq" New England Biolabs: Reactivi pentru industria științelor vieții. Disponibil aici
2. "Polimeraza ADN-ului de fuziune" New England Biolabs. Disponibil aici

Datorită fotografiei:

1.GAM ilustrat de Nivin Nasri'By NivinN - Lucrare proprie, (CC BY-SA 4.0) prin intermediul Commons Wikimedia
2. Adenozina taq - prin munca proprie, (CC BY-SA 3.0) prin intermediul Commons Wikimedia

Biologie moleculara