Diferența dintre electroforeza gelului și SDS PAGE
Share
principala diferență între electroforeza în gel și SDS PAGE este aceea electroforeza pe gel este o tehnică utilizată pentru a separa ADN, ARN și proteine, în timp ce SDS PAGE este un tip de electroforeză în gel utilizat în principal pentru separarea proteinelor. În general, SDS PAGE oferă o rezoluție mai bună decât electroforeza obișnuită pe gel.
Gel electrophoresis și SDS PAGE sunt tehnici în biotehnologie care ajută la separarea macromoleculelor pe baza încărcării și mărimii. În mod tipic, electroforeza pe gel folosește geluri de agaroză pentru separare în timp ce SDS PAGE folosește stări de gel de poliacrilamidă.
Domenii cheie acoperite
1. Ce este electroforeza gelului
- Definiție, procedură, importanță
2. Ce este SDS PAGE
- Definiție, procedură, importanță
3. Care sunt asemănările dintre electroforeza gelului și SDS PAGE
- Schița caracteristicilor comune
4. Care este diferența dintre electroforeza gelului și SDS PAGE
- Compararea diferențelor cheie
Termeni cheie: agaroză, ADN, electroforeză pe gel, poliacrilamidă, proteine, SDS PAGE
Ce este electroforeza gelului
Electroforeza pe gel este o tehnică care separă fragmente de macromolecule cum ar fi ADN, ARN și proteine pe baza mărimii și încărcării lor. În timpul electroforezei pe gel, macromoleculele se deplasează sub influența unui câmp electric pe o matrice de gel care conține pori prin care se deplasează macromoleculele. Gel electrophoresis este tehnica generala care analizeaza ADN-ul din PCR, RFLP, clonare, tehnici de secventiere ADN sau blotting. Nanoparticulele pot fi, de asemenea, separate prin electroforeză pe gel. Stema de gel este preparată dintr-o polizaharidă numită agaroză derivată din alge marine. Gelurile de agaroză constau din molecule cu lanț lung de agaroză interconectate ca o păianjen. video 1 descrie prepararea unui gel de agaroză.
Atât ADN-ul cât și ARN-ul conțin grupări fosfat la fiecare dintre nucleotidele lor monomere. Prin urmare, ele au o sarcină negativă egală în întreaga moleculă. Mai mult, migrează spre electrodul pozitiv sub câmpul electric. Viteza migrării depinde de mărimea acidului nucleic. Moleculele mai scurte migrează mai repede prin pori, în timp ce cele mai mari necesită ceva timp.
Figura 1: benzi ADN pe un gel de agaroză
Ce este SDS PAGE
SDS PAGE (electroforeza pe bază de dodecil sulfat de sodiu-gel de poliacrilamidă) este o tehnică analitică utilizată pentru a separa moleculele încărcate pe baza mărimii. În acest proces, SDS este folosit pentru a izola proteinele prin denaturarea acestora. Deoarece SDS este un detergent; structura terțiară a proteinelor este întreruptă de ea, aducând proteina pliată în jos într-o moleculă liniară. De asemenea, acopera molecula de proteine liniare cu o sarcina negativa uniforma. SDS PAGE constă din două geluri cu concentrații diferite. Stratul superior se numește gelul de stivuire la care sunt încărcate probele, în timp ce stratul inferior este denumit gel de descompunere. Concentrația de poliacrilamidă a gelului de stivuire este de 3,5-4% (mărimea porilor mari) și concentrează proteinele într-o singură bandă. Concentrația de poliacrilamidă din gelul de separare este de 4-20% (mărimea porilor mici) și separă proteinele de dimensiunea lor. videoclip 2 arată pregătirea unei pagini SDS.
SDS PAGE asigură o separare rapidă a proteinelor, ajutând la analiza ulterioară, cum ar fi Western blotting.
Figura 2: Benzi de proteine pe SDS PAGE
Deoarece puterea de rezoluție a SDS PAGE este mai mare decât un gel obișnuit de agaroză, SDS PAGE ajută la separarea fragmentelor ADN mici cu dimensiunea de 5-500 bp.
Asemănări între electroforeza gelului și SDS PAGE
- Gel electrophoresis și SDS PAGE sunt tehnici care separă macromolecule pe baza încărcării și mărimii lor.
- Ambele tehnici folosesc o înjunghiere a gelului cu pori mici prin care se deplasează macromoleculele.
- Forța motrice este diferența de potențial dintre cei doi electrozi.
Diferența dintre electroforeza gelului și SDS PAGE
Definiție
Electroforeză cu gel: Tehnica folosită pentru a separa fragmente de macromolecule cum ar fi ADN, ARN și proteine pe baza mărimii și încărcării lor
SDS PAGE: O tehnică analitică folosită pentru a separa moleculele încărcate pe baza mărimii
Compoziţie
Electroforeză cu gel: Egal pe tot gelul; alcătuit din agaroză
SDS PAGE: Două geluri cu concentrații diferite; alcătuit din poliacrilamidă
Executați configurarea
Electroforeză cu gel: Fuga orizontală
SDS PAGE: Vertical run
Metodologia de turnare
Electroforeză cu gel: Setează în timp ce se răcește
SDS PAGE: Setează printr-o reacție chimică
Dimensiunea porilor
Electroforeză cu gel: Dimensiunea porilor nu este uniformă; este mai mare concentrația de agaroză, dimensiunea porilor este mai mică
SDS PAGE: Dimensiunea porilor este uniformă; raportul dintre acrilamidă și bis-acrilamidă determină dimensiunea porilor
Concentraţie
Electroforeză cu gel: 0,5-2%
SDS PAGE: 6-15%
Separare
Electroforeză cu gel: 50-20 000 bp acizi nucleici
SDS PAGE: Proteine de 5-250.000 Da
Condiții
Electroforeză cu gel: În general, rulați în condiții indirecte
SDS PAGE: Condiții de denaturare
preparare
Electroforeză cu gel: Simplu
SDS PAGE: Un proces complex
colorare
Electroforeză cu gel: Cu bromură de etidiu
SDS PAGE: Colorarea cu Coomassie sau colorarea cu argint
Concluzie
Electroforeza pe gel este o tehnică analitică care separă macromoleculele cum ar fi ADN, ARN și proteine pe baza mărimii lor. SDS PAGE este un tip de electroforeză în gel utilizat în principal pentru separarea proteinelor în condiții de denaturare. SDS PAGE are o putere de rezolvare mai mare comparativ cu electroforeza obișnuită pe gel. Principala diferență între electroforeza pe gel și SDS PAGE este tipul de macromolecule separate și procedura lor.
Referinţă:
1. "Electroforeza gelului" Academia Khan, disponibil aici
2. "Electroforeza pe gel de poliacrilamidă SDS (SDS-PAGE)" Diamantina Institute, 26 aprilie 2017, disponibil aici
Datorită fotografiei:
1. "Electroforeza gelului 2" Von Mnolf - Fotografie realizată în Innsbruck, Austria (CC BY-SA 3.0) prin Wikimedia Commons
2. "Coomassie3" De Yikrazuul - Muncă proprie (CC BY-SA 3.0) prin Wikimedia Commons
