Diferența dintre blocajele sudice nordice și cele occidentale

principala diferență între sudul de nord și Western blotting este că Southern blotting implică identificarea ADN-ului, iar Northern blotting implică identificarea ARN-ului, în timp ce Western blotting implică identificarea proteinelor.

Sud, nord și vest sunt trei tehnici de blot utilizate pentru a detecta o probă specifică a ADN-ului, ARN-ului sau a proteinei. În timpul blotării, macromoleculele sunt transferate pe o membrană din gel și făcute să se lege cu un acid nucleic specific sau anticorp care ajută la detectarea.

Domenii cheie acoperite

1. Ce este Southern Blotting
     - Definiție, proces, aplicații
2. Ce este Northern Blotting
     - Definiție, proces, aplicații
3. Ce este Western Blotting
     - Definiție, proces, aplicații
4. Care sunt asemănările dintre sudul nordic și Western Blotting
     - Schița caracteristicilor comune
5. Care este diferența dintre blocajele sudice nordice și cele occidentale
     - Compararea diferențelor cheie

Termeni cheie

Anticorp, ADN, Electroforeză, Blotare Northern, ARN, Proteine, Blotting Southern, Western Blotting

Ce este Southern Blotting

Blotul de sud este tehnica utilizată pentru a detecta o secvență ADN specifică într-un amestec de ADN-uri. Pașii de bază ai unui blot sudic sunt după cum urmează.

Electroforeză - Se separă proba ADN în benzi distincte pe baza mărimii prin electroforeză în gel.

Transfer - În timpul transferului, o membrană de nitroceluloză este pusă în contact cu gelul și benzile ADN se deplasează pe membrană prin acțiunea capilară. 

Detectarea secvențelor specifice - Secvența țintă de pe membrană este hibridizată cu secvența oligonucleotidică marcată specifică numită sondă de hibridizare. Sonda de hibridizare este scurtă, de dimensiune de 100-500 bp, moleculă de ADN monocatenar. Stringența, care depinde de temperatura și concentrația de sare a tamponului de hibridizare, afectează hibridizarea. Restricția ridicată definită de temperatura ridicată și de concentrația scăzută a sării sporește specificitatea hibridizării, în timp ce rigiditatea redusă definită de temperatură scăzută și concentrația ridicată de sare scade specificitatea.

Figura 1: Southern Blotting

Scopul principal al Southern blotting este de a detecta o secvență ADN specifică într-o probă. Tehnica este utilizată în amprentarea ADN, testarea paternității, identificarea victimelor și identificarea penală. De asemenea, ajută la identificarea genelor specifice, în RFLP (polimorfismul lungimii fragmentelor de restricție), mutația și identificarea rearanjării genelor, bolile genetice și agenții infecțioși.

Ce este Northern Blotting

Blotarea Northern este tehnica utilizată pentru a detecta un ARN specific într-un amestec de ARN-uri. Pașii de bază ai unui Blot Northern sunt după cum urmează.

Electroforeză - Se separă proba de ARN în funcție de dimensiune în benzi distincte.

Transfer - Prin acțiunea capilară, benzile ARN din gel sunt transferate pe membrană.

Detectarea secvențelor specifice - Secvența ARN țintă este detectată prin hibridizare cu o probă de oligonucleotidă marcată formată din ADN.

Figura 2: Northern Blotting

Deoarece blotul Northern poate identifica secvența ARN specifică într-o probă, ea poate fi utilizată în studiile de exprimare a genei. De asemenea, poate ajuta în diagnosticarea bolilor.

Ce este Western Blotting

Western blot este o tehnică de blot folosită pentru a detecta o secvență specifică de aminoacizi într-un amestec de proteine. Pașii de bază ai unui blot Western sunt după cum urmează.

Electroforeză - Proteinele individuale sunt separate pe baza dimensiunii în benzi prin SDS PAGE.

Transfer - Bandele de proteine ​​din gel sunt transferate pe o membrană prin blot.

Detectarea proteinelor specifice - Membrana cu proteine ​​separate este incubată cu un anticorp primar care se leagă numai la proteina specifică. Un anticorp secundar, care este marcat cu o enzimă, cum ar fi peroxidaza de hrean (HRP) sau fosfatază alcalină, este utilizat pentru a detecta anticorpul primar. Când este incubat cu substratul, acțiunea enzimei vizualizează legarea anticorpilor la o regiune specifică a membranei.

Figura 3: Western Blotting

Western blottingul se numește și blot proteic sau imunoblotting. Poate identifica numărul de proteine ​​dintr-o probă, prezența bacteriilor și a virusului în ser și prezența anticorpilor HIV în ser. De asemenea, poate detecta proteine ​​defecte. Mai mult decât atât, Western blotting este testul definitiv pentru hepatita B, boala Creutzfeldt-Jacob, boala Lyme și herpes.

Asemănări între sudarea nordică și cea occidentală

• Blotarea Southern, Northern blotting și Western blotting sunt trei tehnici de blot utilizate pentru a identifica un anumit tip de macromolecule într-un eșantion.
• Cele trei etape ale tehnicilor de ștergere sunt electroforeza, transferul și detectarea.
• Fiecare tehnică necesită denaturarea și blocarea cu excesul, macromoleculele corespunzătoare.
• Fiecare tehnică are aplicații în biotehnologie și medicină.

Diferența dintre blocajele sudice nordice și cele occidentale

Definiție

Southern blotting se referă la o procedură pentru identificarea secvențelor specifice de ADN, în timp ce Northern blot se referă la o adaptare a procedurii Southern blot folosită pentru a detecta secvențe specifice de ARN prin hibridizare cu ADN complementar și Western blot se referă la o procedură de blot folosită pentru a identifica amino -acid în proteine.

Dezvoltat de

Southern blotting a fost dezvoltat de Edward M. Southern în 1975. Northern blotting a fost dezvoltat de Alwine și colegii săi în 1979, iar Western blotting a fost dezvoltat de grupul lui George Stark de la Universitatea Stanford în 1979.

Molecule detectate

Blocarea Southern detectează secvențe ADN specifice, Northern blotting detectează secvențe ARN specifice, în timp ce Western blot detectează proteine ​​specifice.

Electroforeză cu gel

Southern blotting implică electroforeza pe gel de agaroză și Northern blotting implică gel de agaroză de formaldehidă denaturată, în timp ce Western blotting implică SDS PAGE.

Metoda de blotare

Atât bloturile sudice cât și cele nordice implică transferul capilar, în timp ce blotul Western implică un transfer electric.

sonde

Blocarea Southern utilizează sonde ADN, în timp ce blot-ul Northern utilizează sonde cADN și Western blotting utilizează anticorpi primari și secundari.

cerere

Southern blotting este folosit pentru a identifica secvențe de gene specifice și amprente ADN. Blotarea Northern este utilizată în analiza expresiei genelor, iar Western blotting este utilizat în diagnosticul bolii.

Concluzie

Blotul Southern identifică secvența ADN specifică, în timp ce blot-ul Northern identifică secvența ARN specifică, iar Western blot identifică secvența de proteină specifică într-o probă. Prin urmare, principala diferență dintre cele trei tehnici de blot este tipul de macromolecule pe care le detectează.

Referinţă:

1. "Southern Blotting: Principiu, Procedură și Aplicare". NOTE ONLINE BIOLOGY, 4 Dec. 2017, Disponibil aici
2. Kochunni, Deena T și Jazir Haneef. "Northern Blotting: Principiu, procedură și aplicații". Examenele de biologie 4 U, disponibile aici
3. "Tehnica Western Blotting: principiu, procedură și aplicare -". NOTE BIOLOGICE ONLINE, 4 Dec. 2017, disponibile aici

Datorită fotografiei:

1. "Figura 17 01 05" Prin CNX OpenStax - (CC BY 4.0) prin Wikimedia Commons
2. "Diagrama Northern blot" de Ilewieszoośmiornicach - Activitate proprie (CC BY-SA 4.0) prin Wikimedia Commons   
3. "Western Blotting" De Cawang - Activitate proprie (CC0) prin Wikimedia Commons