Differkinome

Care este diferența dintre metoda ELISA directă și cea indirectă?

Ştiinţă
Share

principala diferență între ELISA directă și indirectă este asta în ELISA direct, anticorpul primar este direct conjugat cu enzima de detecție, în timp ce în ELISA indirect, un anticorp secundar care este complementar cu anticorpul primar este conjugat cu enzima de detecție. Aceasta înseamnă că ELISA direct utilizează un singur anticorp, în timp ce testul ELISA indirect utilizează doi anticorpi.

ELISA direct și indirect sunt două metode de ELISA (analiză imunosorbantă legată de enzime) utilizate pentru a detecta prezența unui antigen sau a unui anticorp specific în mediu.

Domenii cheie acoperite

1. Ce este ELISA directă
     - Definiție, procedură, caracteristici
2. Ce este ELISA indirectă
     - Definiție, procedură, caracteristici
3. Care sunt asemănările dintre metoda ELISA directă și cea indirectă?
     - Schița caracteristicilor comune
4. Care este diferența dintre metoda ELISA directă și cea indirectă?
     - Compararea diferențelor cheie

Termeni cheie

ELISA direct, enzima de detecție, ELISA indirect, anticorp primar, anticorp secundar, substrat

Ce este ELISA directă

ELISA direct este o metodă de ELISA care permite detectarea antigenului cu un anticorp primar legat de enzime. Această metodă ELISA a fost dezvoltată pentru prima dată de Perlmann și Engvall. Se consideră cea mai simplă formă de ELISA. Etapele ELISA direct sunt prezentate mai jos:

  1. Acoperirea suprafeței plăcii cu proba;
  2. Incubarea plăcii cu anticorpul primar conjugat cu enzima;
  3. Spălarea pentru îndepărtarea anticorpilor nelegați de pe placă;
  4. Adăugarea substratului cerut de reacția enzimatică;
  5. Detectarea semnalelor produse de placă.

Aici, cele două tipuri principale de enzime conjugate cu anticorpul primar sunt HRP (peroxidază de hrean) și fosfatază alcalină. Cele trei tipuri de substraturi utilizate împreună cu HRP sunt OPD (dihidroclorură de o-fenilendiamină), TMB (3,3 ', 5,5'-tetrametilbenzidină) și ABTS (2,2'-azinobis [3-etilbenzotiazol- sulfonic] -diamoniu). Substratul utilizat împreună cu fosfataza alcalină este PNPP (p-nitrofenil fosfat, sare disodică). Reacția enzimatică a substratului determină o schimbare a culorii în mediu, care depinde de tipul de substrat și de enzima utilizată pentru reacție. Aceasta facilitează detectarea probelor cu antigenul țintă. 

Figura 1: ELISA direct

ELISA direct este mai adecvată pentru detectarea cantității de antigen în greutate moleculară mare într-o probă. Cel mai mic număr de pași din această metodă ELISA îl face o analiză mai rapidă. Totuși, datorită costului și timpului încorporat cu etichetarea anticorpului primar cu enzime, utilizarea ELISA directă este destul de rară. Pe de altă parte, produce efecte adverse și asupra antigenului țintă.

Ce este ELISA indirectă

Metoda ELISA indirectă este o altă metodă de ELISA care utilizează doi anticorpi pentru detectarea anticorpului primar și secundar. Etapele ELISA indirect sunt următoarele:

  1. Acoperirea suprafeței plăcii cu proba;
  2. Incubarea plăcii cu anticorpul primar;
  3. Spălarea pentru a îndepărta anticorpii nelegați din placă;
  4. Incubarea plăcii cu anticorpul secundar conjugat cu enzima de detectare;
  5. Spălarea pentru a îndepărta anticorpii nelegați din placă;
  6. Adăugarea substratului cerut de reacția enzimatică;
  7. Detectarea semnalelor produse de placă.

    Figura 2: ELISA indirectă

Testul ELISA indirecte are loc prin două etape de legare a anticorpilor. Pe de altă parte, anticorpul secundar este conjugat cu enzima de detectare. În general, există o mulțime de anticorpi secundari conjugați cu enzime. Aici, anticorpul secundar este în principal un anticorp policlonal, anti-specie. Datorită disponibilității anticorpilor conjugați cu enzime, metoda ELISA indirectă este mai des utilizată în analizele imunologice în detectarea paraziților, a bacteriilor și a virusului. Pe de altă parte, mai mulți anticorpi secundari pot fi legați de anticorpul primar din placă. Prin urmare, sensibilitatea testului este foarte mare.

Asemănări între metoda ELISA directă și cea indirectă

  • ELISA direct și indirect sunt două metode de ELISA în care antigenul de interes este atașat direct la placă.
  • Ambele metode implică detectarea prezenței unei molecule de proteină specifice într-o probă. Această moleculă de proteină este atașată direct la placă.
  • Plăcile cu 96 de godeuri sau tuburile cu bandă cu 8 sonde sunt utilizate în ambele metode. Ambele plăci și tuburi sunt realizate din polistiren. Plăcile cu 96 de godeuri asigură o mulțime de spații pentru determinarea diluției optime pentru reacție. Între timp, tuburile cu bandă cu 8 sonde sunt mai bune pentru testele fine reglate.

Diferența dintre metoda ELISA directă și cea indirectă

Definiție

Elisa direct se referă la un tip de ELISA în care anticorpul primar este conjugat cu enzima de detecție, în timp ce testul ELISA indirect se referă la un tip de ELISA în care anticorpul secundar este conjugat cu enzima de detecție.

Numărul de anticorpi utilizați

ELISA direct utilizează un anticorp, care este anticorpul primar, în timp ce metoda ELISA indirectă utilizează doi anticorpi, primar și anticorp secundar. Aceasta este diferența principală dintre ELISA directă și indirectă.

Enzima de detectare este conectată la

Mai mult, enzima de detectare este legată la anticorpul primar în ELISA direct, în timp ce enzima de detecție este legată la anticorpul secundar în testul ELISA indirect.

Intensitatea semnalelor

O altă diferență între metoda ELISA directă și indirectă este aceea că semnalele produse prin ELISA direct sunt mai puțin intense, în timp ce semnalele produse de ELISA indirect sunt mai intense datorită amplificării semnalului.

Semnale de fundal

Totuși, ELISA direct produce mai multe semnale de fond decât ELISA indirect.

Sensibilitate

Metoda ELISA directă este mai puțin sensibilă, în timp ce metoda ELISA indirectă este mai sensibilă. Aceasta este, de asemenea, o diferență între ELISA directă și indirectă. 

Reactivitatea încrucișată

O altă diferență între ELISA direct și indirect este reactivitatea încrucișată. Adică, reactivitatea încrucișată este minimă în ELISA direct, în timp ce este semnificativă în cazul testului ELISA indirect.

Timp

Mai mult, metoda ELISA directă este mai puțin consumatoare de timp datorită unor pași mai puțini, în timp ce metoda ELISA indirectă este mai consumatoare de timp datorită etapelor de legare a anticorpului dublat.

Frecvența de utilizare

În timp ce testul ELISA direct este relativ rar, metoda ELISA indirectă este mai frecventă.

Concluzie

ELISA direct utilizează doar anticorpul primar pentru detectarea unui antigen specific. Aceasta înseamnă că anticorpul primar este conjugat cu enzima de detectare în ELISA directă. Dar, metoda ELISA indirectă utilizează un anticorp primar care se leagă cu antigenul, în timp ce anticorpul secundar conjugat cu enzima se leagă la anticorpul primar. ELISA direct este mai puțin frecvent datorită disponibilității mai scăzute a anticorpului primar conjugat cu enzime. Principala diferență dintre ELISA direct și indirect este numărul de anticorpi utilizați.

Referinţă:

1. "Tipuri de ELISA". Bio-Rad, Laboratoarele Bio-Rad, disponibile aici

Datorită fotografiei:

1. "Diagrama ELISA" de Cavitri - munca proprie (CC BY 3.0) prin intermediul Wikimedia Commons  
2. "ELISA indirectă" De Cawang - Activitate proprie (CC0) prin Wikimedia Commons  

Ştiinţă
×