Care este diferența dintre plasmida digerată singular și plasmida digerată dublu

principala diferență între plasmida unică digerată și plasmida digerată dublu este aceea singurele enzime de restricție au ca rezultat o singură plasmidă digerată, în timp ce două tipuri diferite de enzime de restricție au ca rezultat o plasmidă digerată dublu. Mai mult, inserarea fragmentului de ADN străin poate avea loc în ambele orientări cu plasmide digerate singure, în timp ce inserția fragmentului de ADN străin are loc doar în orientarea corectă cu plasmide digerate dublu.

Plasmida digerată singular și plasmida digerată dublu sunt două tipuri de plasmide utilizate în tehnologia ADN recombinant pentru a produce ADN recombinant.

Domenii cheie acoperite

1. Ce este un plasmid digerat unic
     - Definiție, auto-ligare, orientare
2. Ce este un plasmid digerat dublu
     - Definiție, digestie dublă, orientare
3. Care sunt asemănările dintre plasmida digerată singular și plasmida digerată dublu
     - Schița caracteristicilor comune
4. Care este diferența dintre plasmida digerată singular și plasmida digerată dublu
     - Compararea diferențelor cheie

Termeni cheie

Plasmida digerată dublu, digestie dublă, orientare, plasmidă recombinantă, plasmidă digerată unică, digestie singulară

Ce este un plasmid digerat unic

Plasmidele digerate singure sunt un tip de plasmide digerate numai cu o singură enzimă de restricție. Prin urmare, acest proces se numește digestie singulară. În general, plasmidele utilizate în tehnologia ADN recombinant conțin numai un singur situs de restricție pentru o enzimă de restricție particulară. Prin urmare, digestia singulară face plasmida circulară liniară, dând un singur fragment ADN. Cele două capete ale fragmentului ADN sunt compatibile una cu cealaltă; prin urmare, ele pot suferi auto-ligare în timpul ligării ulterioare cu inserția. 

Figura 1: plasmidă digerată singular

Aici, inserția trebuie, de asemenea, să fie digerată cu aceeași enzimă de restricție pentru a produce capete compatibile cu plasmidul. Prin urmare, ligarea are loc în două orientări posibile: orientarea de la 5 'la 3' și orientarea de la 3 'la 5'. Cu toate acestea, inserțiile cu aceeași orientare ca regiunea promotor pot fi supuse transcrierii. Astfel, această orientare este cunoscută ca orientare corectă. Înainte de a continua, plasmidele recombinante cu orientare corectă trebuie să fie selectate prin screening-ul coloniilor transformate fie prin PCR, fie prin teste biochimice.

Ce este un plasmid digerat dublu

Plasmide digerate dublu sunt plasmidele care suferă o digestie dublă cu două enzime de restricție. Aici, această reacție poate fi efectuată într-un singur tub. Locurile de restricție pentru ambele digerări apar în situsul de recunoaștere a restricției din plasmidă. Prin urmare, reacția de digestie dublă conduce, de asemenea, la un fragment ADN unic. Dar, fiecare dintre cele două capete este produs de o altă enzimă de restricție. Prin urmare, aceste scopuri nu sunt compatibile unul cu altul și nu se supun autogripării.

Figura 2: Plasmida digerată dublu

Cel mai important, insertul poate fi ligat în orientarea corectă cu plasmide digerate dublu prin digestia capetelor insertului pentru a se lega în orientarea corectă. Prin urmare, plasmidele digerate dublu dau doar plasmidele recombinante cu orientare corectă, ceea ce face ca selectarea ulterioară a orientării să nu fie necesară. Acest lucru economisește timp deoarece reduce o etapă completă de la procedura de producere a ADN-ului recombinant.

Asemănări între plasmida digerată singular și plasmida digerată dublu

• Plasmida digerată singular și plasmida digerată dublu sunt două tipuri de plasmide utilizate în tehnologia ADN recombinant.
• Atât digestia singulară cât și digestia dublă se pot face printr-o reacție cu un singur pas.
• De asemenea, în ambele, fragmentul de ADN străin este inserat între cele două capete ale plasmidelor digerate.
• Mai mult, atât digestia singulară, cât și cea dublă a plasmidei produc un fragment ADN unic în timp ce două fragmente de ADN apar atunci când se digeră o plasmidă recombinantă.

Diferența dintre plasmida digerată singular și plasmida digerată dublu

Definiție

Plasmida digerată singular se referă la o plasmidă digerată de o singură enzimă de restricție în timp ce plasmidul digerat dublu se referă la o plasmidă digerată de două enzime de restricție diferite. Aceste definiții explică principala diferență între plasmida unică digerată și plasmida digerată dublu.

Se termină

În plasmidele digerate singure, digestia cu aceeași enzimă de restricție produce ambele capete, în timp ce, în plasmide digerate dublu, digestia cu o enzimă de restricție diferită produce fiecare capăt. Prin urmare, aceasta este o diferență importantă importantă între plasmida digerată singular și plasmida digerată dublu.

Auto-ligare

În plus, auto-ligarea este o diferență majoră majoră între plasmida singură digerată și plasmida digerată dublu. Capetele plasmidelor digerate singure sunt compatibile una cu cealaltă pentru auto-ligare, în timp ce capetele plasmidelor digerate dublu nu sunt compatibile între ele pentru auto-ligare.

Importanţă

Mai mult, inserarea fragmentului de ADN străin poate să apară în ambele orientări în plasmidele digerate singure, în timp ce inserția fragmentului ADN străin se poate face în orientarea corectă în plasmidele digerate dublu.

Tipuri de plasmide recombinante

Un plasmid simplu digerat poate produce trei tipuri de plasmide: două plasmide recombinante cu orientări opuse și o plasmidă auto-ligată fără inserție. Între timp, o plasmidă digerată dublu poate produce un singur tip de plasmidă recombinantă, care este în orientarea corectă. Astfel, aceasta este o altă diferență principală între plasmida digerată singular și plasmida digerată dublu. 

Economisire de timp

Fragmentele recombinante ale plasmidelor digerate singure trebuie să fie selectate pentru orientarea lor corectă în timp ce plasmidele digerate dublu asigură orientarea corectă a fragmentului ADN străin. Prin urmare, plasmidele digerate dublu economisesc timp în tehnicile ADN recombinant, nu plasmide digerate singure.

Concluzie

Plasmidele digerate singure sunt digerate cu o singură enzimă de restricție, care are ca rezultat capete compatibile cu auto-ligare. Mai mult, ligarea lor cu fragmentul ADN străin poate să apară în ambele orientări. Prin urmare, trebuie selectate plasmide recombinante cu orientare corectă. Pe de altă parte, plasmidele digerate dublu sunt digerate cu două enzime de restricție diferite. Prin urmare, cele două capete nu sunt compatibile pentru auto-ligare. În plus, fragmentul ADN străin poate fi legat în orientarea corectă cu plasmide digerate dublu. Prin urmare, diferența principală dintre plasmida unică digerată și plasmida digerată dublu este tipul de digestie și orientarea insertului.

Referinţă:

1. Griffiths AJF, Miller JH, Suzuki DT, și colab. O introducere în analiza genetică. Ediția a 7-a. New York: W. H. Freeman; 2000. Realizarea ADN-ului recombinant. Disponibil aici