Diferența dintre PCR și PCR în timp real

PCR vs PCR în timp real

PCR sau reacția în lanț a polimerazei este o descoperire revoluționată în biologia moleculară modernă, dezvoltată pentru prima dată de chimistul Kary Mullis în 1983. Aceasta permite ca o singură secvență într-un ADN complex să fie amplificată pentru analiză. Ideea de bază a PCR este aceea că doi primeri, care sunt complementari la firele opuse ale unei secvențe ADN, sunt orientate unul spre celălalt; primerii produc filamente complementare, fiecare conținând celălalt primer. Prin urmare, rezultatul este o cantitate mare dintr-o secvență corespunzătoare ADN-ului care se află între cele două primeri. Enzima ADN polimerază este utilizată pentru a extinde primerii în PCR. ADN-polimeraza este o enzimă termostabilă și are capacitatea de a supraviețui la temperaturi ridicate (94 până la 95 ° C) utilizate pentru denaturarea ADN-ului șablon.

PCR implică trei etape, și anume, cicluri repetate de denaturare, recoacerea primerilor și sinteza ADN-ului. Pentru a efectua această reacție este utilizată o mașină cu termociclu, astfel încât aceasta să poată fi programată pentru a schimba rapid și precis temperaturile. Aplicațiile PCR sunt investigațiile penale, amprenta ADN, detectarea agenților patogeni și analiza ADN a speciilor umane timpurii.

Ce este PCR convențional?

Există trei etape majore ale PCR convențional, și anume: Etapa de amplificare a ADN, separarea PCR și detectarea produselor. Separarea segmentelor ADN se face de obicei prin electroforeză pe gel de agaroză. Produsele sunt apoi colorate cu bromură de etheidim. În cele din urmă, detectarea se realizează prin vizualizarea benzilor pe geluri sub lumină UV. Prin urmare, rezultatele finale ale PCR convenționale nu sunt exprimate ca numere. În mod obișnuit, PCR convențional este capabil să detecteze un singur parametru.

Ce este PCR în timp real?

PCR în timp real poate detecta amplificarea produselor, deoarece produsele sunt sintetizate. Odată cu dezvoltarea tehnologiei, PCR a devenit o tehnică foarte populară, în special pentru detectarea și identificarea bacteriilor din alimente. PCR în timp real utilizează un sistem de vopsire fluorescent și un termociclu echipat cu capacitatea de detectare fluorescentă.

Care este diferența dintre PCR convențional și PCR în timp real?

• PCR convențional este mai consumator de timp, deoarece utilizează electroforeza în gel pentru a analiza produsele PCR amplificate. În contrast, PCR în timp real este mai puțin consumator de timp, deoarece poate detecta amplificări în fazele timpurii ale reacției.

• PCR în timp real colectează date în faza de creștere exponențială a PCR, în timp ce PCR tradițional colectează date la punctul final al reacției.

• Rezultatele punctului final al PCR convențional nu pot fi foarte precise, dar rezultatele PCR în timp real sunt foarte precise.

• PCR în timp real este mai sensibil decât PCR convențional.

• PCR convențional are o rezoluție foarte slabă, în timp ce PCR în timp real poate detecta modificări foarte mici din cauza rezoluției ridicate.

• Detectarea punctului final al PCR convențional are un interval dinamic scurt, în timp ce detecția PCR în timp real are un domeniu dinamic larg.

• Spre deosebire de metodele PCR convenționale, tehnicile de detectare automată se găsesc în PCR în timp real.

• PCR convențional este foarte sofisticat și necesită multă muncă decât PCR în timp real.

• Spre deosebire de PCR în timp real, PCR convențional nu poate face diferența între bacterii moarte și bacterii vii.

• PCR în timp real utilizează sistemul de colorare fluorescentă pentru a detecta produsele în timp ce PCR convențional utilizează bromură de etidiu și lumină UV pentru a vizualiza benzi în mediul gel de agaroză.