Diferența dintre metoda ELISA directă și cea indirectă

Diferența cheie - metoda ELISA directă / indirectă
 

Analiza imunologică legată de enzime (ELISA), cunoscută și ca imunoteste enzimatică, este un test serologic care detectează anticorpi în sânge. Este folosit ca instrument de diagnostic pentru a afla dacă pacientul a fost expus la un anumit tip de virus sau alt agent infecțios (antigen) și dacă organismul a produs anticorpi împotriva infecției. De asemenea, ELISA poate identifica infecțiile din trecut și cele actuale. Prin urmare, ELISA este adesea folosit ca un test de prescreening de către medici înainte de analiza aprofundată a bolilor. Acest test poate fi efectuat în laborator prin luarea unei probe de sânge de la pacient. Există două tipuri de test ELISA: ELISA direct și ELISA indirectă. Diferența cheie dintre ELISA direct și indirect este aceea testul ELISA indirect este mai sensibil și necesită adăugarea unui anticorp secundar in timp ce direct ELISA este mai puțin sensibilă și utilizează numai un anticorp primar.

CUPRINS
1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Ce este ELISA directă
3. Ce este ELISA indirectă
4. Comparație comparativă comparativă - ELISA indirectă vs. indirectă
5. rezumat

Ce este ELISA directă?

ELISA este un test de diagnostic al bolii efectuat pentru a identifica prezența anumitor antigene sau anticorpi în sânge. Se face ca un test de placă. Foloseste anticorpi legati de enzime usor analizate. Prezența antigenelor în proba de ser se leagă cu anticorpi specifici legați de enzime. În etapa finală, se adaugă un substrat specific pentru a reacționa cu enzima. Enzima transformă substratul într-un produs colorat sau producătoare de semnal. Modificarea culorii în substratul chimic evidențiază prezența unui anticorp specific în proba serică. Testarea directă ELISA utilizează numai un anticorp primar legat de enzimă. După legarea la antigen, acesta schimbă rapid culoarea, indicând prezența agentului infecțios în sânge. Cu toate acestea, intensitatea semnalelor este mai slabă în ELISA direct, deoarece epitopii sunt limitați la legarea antigenelor. Prin urmare, metoda ELISA directă este mai puțin sensibilă comparativ cu metoda ELISA indirectă.

Figura 01: Testul ELISA direct

Ce este ELISA indirectă?

ELISA poate fi efectuată utilizând două tipuri de anticorpi, și anume; anticorp primar și anticorp secundar. Instrumentul indirect ELISA utilizează ambele tipuri de anticorpi pentru a amplifica semnalele pentru o mai bună detectare. Tehnica ELISA indirectă se efectuează după cum urmează.

1. Plăcile sunt incubate cu antigeni și spălate pentru a bloca legarea nespecifică.
2. Se adaugă apoi anticorpi primari și se spală.
3. Anticorp secundar legat de enzimă se adaugă și se spală.
4. Se adaugă un substrat și se lasă să reacționeze cu enzimele.
5. Se detectează semnale și se identifică prezența sau absența antigenului specific din probă.

În testul ELISA indirect, mai mulți anticorpi secundari se pot lega de un singur anticorp primar. Anticorpii secundari sunt legați de enzimele ușor analizate. Prin urmare, o legare poate face un semnal puternic datorită mai multor interacțiuni. Prin urmare, metoda ELISA indirectă este mai sensibilă decât metoda ELISA directă. Cu toate acestea, metoda ELISA indirectă poate produce semnale nespecifice datorită reacțiilor încrucișate ale anticorpilor secundari.

Figura 02: Testul ELISA indirect

Care este diferența dintre ELISA direct și indirect??

Test ELISA direct vs indirect
ELISA direct este mai puțin sensibil în comparație cu ELISA indirectă.	Testul ELISA indirecte este mai sensibil.
Timp luat
Testul direct ELISA este un proces rapid.	Testul ELISA indus este consumator de timp.
Utilizarea anticorpilor
Numai un tip de anticorpi (anticorpi primari) este utilizat în ELISA direct.	Anticorpii primari și secundari sunt utilizați pentru testul ELISA indirect.
Legătura cu enzimele
Anticorpii primari sunt legați de enzime.	Anticorpii secundari sunt legați de enzime.
Reactivitatea secundară a doi anticorpi
ELISA direct elimină reactivitatea încrucișată a anticorpilor secundari.	Testul ELISA indirecte este afectat de reactivitatea încrucișată a anticorpilor secundari.
semnale
Semnalele sunt slabe în comparație cu metoda ELISA indirectă.	Semnalele sunt amplificate în metoda ELISA indirectă. Prin urmare, este ușor de detectat.

Rezumat - ELISA direct vs. indirect

ELISA este o tehnică biochimică folosită în principal în imunologie pentru a detecta prezența unui anticorp sau a unui antigen într-o probă de sânge a unui pacient. Se poate realiza prin două procese cunoscute sub denumirea de ELISA direct sau indirect. Testul ELISA direct utilizează numai anticorpi primari pentru detectarea antigenului, în timp ce testul ELISA indirect utilizează atât anticorpi primari, cât și secundari. În ELISA direct, anticorpii primari sunt etichetați, în timp ce în ELISA indirect sunt anticorpi secundari etichetați. Aceasta este diferența dintre ELISA directă și indirectă.

Referințe
1. "Analiza imunosorbantă legată de enzime (ELISA)". Buletinul Organizației Mondiale a Sănătății. Biblioteca Națională de Medicină din S.U.A., 1976. Web. 29 martie 2017
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen și J. Van Der Veen. "Analiza imunosorbantă legată de enzimă care utilizează antigenul marcat pentru detectarea anticorpilor imunoglobulină M și A în toxoplasmoză: comparație cu imunofluorescența indirectă și testul imunosorbant dublu-sandwich legat de enzimă", Journal of Clinical Microbiology. Biblioteca Națională de Medicină din S.U.A., iunie 1983. Web. 29 martie 2017

Datorită fotografiei:
1. "Diagrama ELISA" de Cavitri - Lucrare proprie (CC BY 3.0) prin intermediul Commons Wikimedia 
2. "ELISA indirect" de Cawang - munca proprie (CC0) prin Commons Wikimedia