Diferența dintre imunofluorescență și imunohistochimie

Diferența cheie - imunofluorescență vs. imunohistochimie
 

Diagnosticarea bolilor, care utilizează metode biologice moleculare, a devenit o zonă emergentă a tehnologiei clinice de laborator. Acesta include toate testele și metodele de identificare a unei boli și de a înțelege cauza unei boli prin analizarea ADN-ului, a ARN-ului sau a proteinelor exprimate într-un organism. Progresele rapide ale diagnosticului molecular au permis cercetarea fundamentală asupra bolilor transmisibile și non-transmisibile. Acestea sunt folosite pentru a determina modificările în secvența sau nivelurile de exprimare în genele sau proteinele importante implicate în boală. Imunofluorescența (IF) și imunohistochimia (IHC) sunt două astfel de tehnici utilizate pe scară largă în biologia cancerului. IF este un tip de IHC în care se folosește o metodă de detectare a fluorescenței pentru analiza anticorpilor monoclonali și policlonali, în timp ce IHC folosește metode chimice pentru a detecta anticorpii monoclonali și policlonali. Aceasta este diferența cheie dintre IF și IHC.

CUPRINS

1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Ce este imunofluorescența? 
3. Ce este imunohistochimia
4. Asemănări între imunofluorescență și imunohistochimie
5. Comparație comparativă - imunofluorescență vs. imunohistochimie în formă tabulară
6. rezumat

Ce este imunofluorescența (IF)?

Imunofluorescența este o tehnică de detectare în care anticorpii utilizați în analiză sunt marcați utilizând coloranți fluorescenți sau proteine ​​fluorescente pentru scopul de detectare. Etichetele anticorpilor secundari pot duce la semnale de fundal nedorite; prin urmare, tehnica IF se bazează pe etichetarea anticorpului primar în sine în prezent pentru a evita semnalele nedorite în timpul detectării. Prin această tehnică, se împiedică legarea nespecifică între anticorpul primar și secundar și este mai rapidă, deoarece nu este implicată nici o etapă de incubare secundară. De asemenea, calitatea datelor este îmbunătățită.

Figura 01: Dubla imunofluorescență dublă pentru BrdU, NeuN și GFAP

Fluorocromii sau coloranții fluorescenți sunt compuși care pot absorbi radiațiile, de preferință radiațiile ultraviolete care sunt excitate. Atunci când particulele ajung la starea de bază din starea excitat, ele emit radiații care sunt capturate și detectate de un detector pentru a forma un spectru. Este foarte important ca eticheta fluorescentă să fie compatibilă și stabilă pentru reacția particulară și trebuie să fie conjugată corespunzător cu anticorpul pentru a obține rezultate precise. Unul dintre cele mai utilizate fluorochromi este izotiocianatul de fluoresceină (FITC), care are culoarea verde, cu lungimi de undă de absorbție și emisie de vârf de 490 nm și respectiv 520 nm. Rhodamina, un alt agent utilizat în IF, este de culoare roșie și are o lungime de undă distinctă de absorbție și de vârf de emisie de 553 nm și 627 nm.

Ce este imunohistochimia (IHC)?

IHC este o metodă de testare moleculară practicată pentru a identifica și a confirma prezența antigenului în celula țintă. Celula țintă ar putea fi o particulă infecțioasă, un patogen microbian sau o celulă tumorală malignă. IHC utilizează anticorpi monoclonali și policlonali pentru a determina prezența antigenelor prezente pe suprafața celulară a celulelor țintă. Tehnica se bazează pe legarea antigen-anticorp. Un marker de detectare este conjugat cu acești anticorpi pentru a detecta prezența sau absența antigenului particular. Acești markeri pot fi markeri chimici, cum ar fi enzime, anticorpi marcați fluorescent sau anticorpi marcați radio.

Figura 02: Sucul mouse-creier colorat de imunohistochimie

Cea mai populară aplicație a IHC este în biologia celulelor canceroase pentru a identifica prezența tumorilor maligne, dar este de asemenea folosită pentru detectarea bolilor infecțioase.

Care sunt asemănările dintre imunofluorescență și imunohistochimie?

• Imunofluorescența și imunohistochimia au loc în condiții in vitro.
• Ambele tehnici se bazează pe antigen-anticorp
• Ambele sunt tehnici foarte rapide.
• Rezultatele tehnicilor sunt reproductibile.
• Ambele au îmbunătățit calitatea datelor.
• Aceste tehnici utilizate în diagnosticarea cancerului și bolilor infecțioase.

Care este diferența dintre imunofluorescență și imunohistochimie?

Imunofluorescență vs. imunohistochimie
IF este o tehnică de detectare în care anticorpii utilizați în analiză sunt marcați utilizând coloranți fluorescenți sau proteine ​​fluorescente pentru detectare.	IHC este o tehnică de detectare în care anticorpii utilizați în analiză sunt etichetați utilizând chimicale sau elemente radioactive pentru detectare.
Precizie
Precizia este mai mare în tehnica IF comparativ cu IHC.	Precizia este mai mică în IHC.
Specificitate
Dacă este mai specific.	IHC este mai puțin specifică.

Rezumat - Imunofluorescență vs imunohistochimie

Mecanismele moleculare au adus multe modificări în domeniul medicinii, dând naștere unor metode avansate de testare moleculară care au dus la revoluții în domeniul diagnosticării. Aceste invenții au condus la o identificare rapidă și exactă a bolii, permițând astfel administrarea și producerea cu succes a medicamentelor. Aceste tehnici sunt, de asemenea, utilizate în farmacologie pentru a găsi țintele medicamentelor și pentru a confirma proprietățile farmacocinetice ale medicamentului în timpul metabolizării medicamentului. IF și IHC sunt două metode de diagnostic care se bazează pe conceptul de legare a antigenului și a anticorpului, deși modul de detectare în ambele tehnici diferă. IF utilizează principiul fluorescenței pentru a detecta antigenul și IHC folosește conceptul de conjugare chimică pentru a detecta antigenul. Aceasta este diferența dintre IF și IHC.

Descărcați versiunea PDF a imunofluorescenței vs. imunohistochimie

Puteți descărca versiunea PDF a acestui articol și o puteți utiliza în scopuri offline conform notei de citare. Descărcați versiunea PDF aici Diferența dintre imunofluorescență și imunohistochimie.

Referințe:

1. Aoki, Valéria și colab. "Imunofluorescența directă și indirectă" Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, Disponibil aici. Accesat 25 august 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha și colab. "Aplicații ale imunohistochimiei", Jurnalul de Științe ale Farmaciei și Bioalimentare, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, august 2012, Disponibil aici. Accesat 25 august 2017.

Datorită fotografiei:

1. "Dubla imunofluorescență colorată pentru BrdU, NeuN și GFAP" Prin Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2, Liu X. - beta1 la șoareci după accident vascular cerebral reduce volumul infarctului și crește neurogenesis în zona subventriculară; PMID 19077183 (CC BY 2.0) prin intermediul Commons Wikimedia
2. "Hipotalamus al unui țesut de șoarece murdar de ABC-Imunohistochimie" By zabbn - Lucrare proprie (CC BY-SA 3.0) prin intermediul Commons Wikimedia