Diferența dintre nitroceluloză și PVDF

Diferența cheie - nitroceluloză vs. PVDF

Western blotting este o metodă care permite detectarea și cuantificarea proteinelor specifice dintr-o probă de proteine. Fiabilitatea tehnicii depinde de alegerea unei membrane corecte pentru absorbția proteinelor din gel. Există diferite tipuri de membrane microporoase. Membranele de nitroceluloză și PVDF sunt două astfel de membrane preferate de cercetători datorită atributelor lor speciale față de celelalte tipuri de membrane. Selecția dintre nitroceluloză sau PVDF este, de asemenea, o altă provocare în Western blotting. Atât nitroceluloza cât și PVDF au o capacitate mare de absorbție a proteinei. Diferența cheie între membrana nitrocelulozei și PVDF este aceea membranele nitrocelulozice nu au capacitatea de a elimina anticorpii și de a reutiliza membrana pentru reprobarea anticorpilor, în timp ce membranele PVDF au capacitatea de stripare și reutilizare.

CUPRINS
1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Ce este nitroceluloza
3. Ce este PVDF?
4. Comparație între ele - nitroceluloză vs. PVDF
5. rezumat

Ce este nitroceluloza?

Nitroceluloza este un polimer fabricat prin tratarea celulozei cu acid azotic și se utilizează pentru a produce membrane microporoase în biologia moleculară, în special pentru tehnici de blotare cum ar fi blotting-ul de la sud, nord și vest. Dimensiunile porilor membranelor de nitroceluloză variază de la 3 la 20 pm. Membranele microporoase de nitroceluloză facilitează detectarea reacției imunochemice care se produce pe suprafața membranei. Prin urmare, membranele de nitroceluloză sunt frecvent utilizate pentru imobilizarea proteinelor și detectarea proteinelor specifice în western blotting. Membranele de nitroceluloză pot, de asemenea, imobiliza glicoproteinele și acizii nucleici.

Membranele de nitroceluloză sunt preferate în testele de curgere laterală datorită mai multor caracteristici. Membranele de nitroceluloză absorb proteinele la o concentrație ridicată. Solventul utilizat pentru a umezi membrana nu diminuează absorbția proteinei membranei nitrocelulozice. Membranele de nitroceluloză pot fi ușor tăiate la dimensiunea dorită a gelului și transferă proteine din gel în membrană prin transfer electric sau capilar. Nitroceluloza permite fluxul mai rapid de proteine prin membrana cu potențial ridicat de legare. Nitroceluloza prezintă o rezistență îmbunătățită la manipulare. Un alt atribut special al membranei de nitroceluloză este faptul că poate fi ușor lipit cu adezivi rezistenți la apă non-solvenți pe diverse suporturi din material plastic.

Figura 01: Membrană de nitroceluloză pentru western blotting

Ce este PVDF??

Difluorura de poliviniliden (PVDF) este fluoropolimer produs prin polimerizarea difluorurii de viniliden și are o capacitate ridicată de imobilizare a proteinelor. Prin urmare, membranele microporoase obținute din PVDF sunt utilizate în tehnicile Western blotting pentru a analiza proteinele specifice din amestecurile de proteine. De asemenea, membranele PVDF pot fi utilizate pentru analiza aminoacizilor și pentru secvențierea proteinelor. Cea mai importantă caracteristică a membranei PVDF față de membrana nitrocelulozei este aceea că poate fi desprinsă cu ușurință de anticorpi și reutilizată pentru sondele ulterioare de anticorpi.

Membranele PVDF sunt mai groase decât membranele de nitroceluloză; prin urmare, mai rezistente la daune în timpul reutilizării. Membranele PVDF sunt foarte hidrofobe. De aceea, trebuie să fie înmuiate în metanol sau izopropanol înainte de utilizare.

Care este diferența dintre nitroceluloză și PVDF?

Nitroceluloza vs. PVDF
Nitroceluloza este un polimer compus din celuloză.	PVDF este un fluoropolimer produs prin polimerizarea difluorurii de viniliden.
Dimensiunea porilor membranei
Dimensiunile tipice ale porilor sunt 0,1, 0,2 sau 0,45μ	Dimensiunile porilor tipice sunt 0,1, 0,2 sau 0,45 pm
Capacitatea de legare a proteinelor
Nitroceluloza are o capacitate de legare la proteine de 80 până la 100 μg / cm².	PVDF are o capacitate de legare a proteinelor de 170 până la 200 μg / cm².
Sensibilitate
Acest lucru are o sensibilitate scăzută în comparație cu PVDF.	Aceasta are o sensibilitate ridicată.
Detectarea proteinelor slab exprimate
Deoarece sensibilitatea este scăzută în membranele de nitroceluloză, aceasta nu este adecvată pentru detectarea proteinelor exprimate slab.	Acest lucru este mai potrivit pentru detectarea proteinelor slab exprimate datorită sensibilității ridicate.
Zgomot de fundal
Acest lucru are zgomot de fond mai scăzut	Acest lucru are zgomot de fond mai mare.
Interacțiunile cu proteinele
Moleculele de proteine se leagă de membranele nitrocelulozice prin interacțiuni hidrofobe.	Proteinele se leagă de membranele PVDF prin interacțiuni hidrofobe și dipolice.
Natura membranei
Nitroceluloza este fragilă și fragilă. Cu toate acestea, sunt disponibile versiuni de nitroceluloză și sunt rezistente.	PVDF este mai durabil și are rezistență chimică mai mare.
Abilitatea de a elimina și reutiliza
Nitroceluloza poate avea dificultati in striparea si reprobarea fara a pierde semnalul.	PVDF este ideal pentru reprobarea și secvențierea aplicațiilor.
potrivire
Nitroceluloza este ideală pentru detectarea proteinelor cu greutate moleculară scăzută.	PVDF este mai adecvată pentru detectarea proteinelor cu greutate moleculară mai mare.
Alte utilizări
Nitroceluloza poate fi utilizată pentru analiza acidului nucleic și blotting punct / slot.	PVDF poate fi utilizat pentru sisteme de secvențiere a proteinelor și sisteme de testare în fază solidă.
Cost
Acest lucru este mai ieftin decât membranele PVDF.	Acest lucru este mai scump decât membranele de nitroceluloză.
Necesitatea de pre-udare
Membranele de nitroceluloză nu necesită presoaking cu metanol	PVDF membranele necesită presoaking cu metanol.

Rezumat - nitroceluloză vs PVDF

Membranele de nitroceluloză au fost primele membrane utilizate comercial pentru analiza fluxului lateral. Ei au o capacitate mare de absorbție a proteinelor. Prin urmare, membranele de nitroceluloză sunt utilizate în western blotting. PVDF este un alt tip de membrană utilizat în western blotting și are, de asemenea, o capacitate mare de absorbție a proteinei. Ambele tipuri sunt utilizate în Western blot pentru analiza proteinelor. Cu toate acestea, membranele PVDF au mai multe atribute speciale, făcându-le mai potrivite decât membranele de nitroceluloză pentru western blotting. Dar, membranele de nitroceluloză sunt mai potrivite pentru detectarea proteinelor cu greutate moleculară scăzută, membranele PVDF sunt mai potrivite pentru detectarea proteinelor cu greutate moleculară ridicată. Aceasta este diferența dintre membranele de nitroceluloză și PVDF.

Datorită fotografiei:
1. "Transferul Western blot" de către Bensaccount la Wikipedia în engleză (CC BY 3.0) prin intermediul Commons Wikimedia

Referinţă:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun și Thomas A. Neubert. "Utilizarea membranelor de nitroceluloză pentru caracterizarea proteinei prin spectroscopie de masă cu ajutorul matricei de desorbție laser / ionizare". Biblioteca Națională de Medicină din S.U.A., 15 iulie 2006. Web. 28 martie 2017
2. "Markeri moleculari și biotehnologie a plantelor". N.p., n.d. Web. 28 martie 2017
3.Monda, 8 aprilie 2013 Tweet. "Magicul este în membrană: Alegeți cu înțelepciune pentru rezultatele celui mai bun blot." Biocompare. N.p., 08 aprilie 2013. Web. 28 martie 2017

Biologie moleculara