Diferența dintre nitroceluloză și membrana de nailon
Share
principala diferență între nitroceluloză și membrana de nylon este că membrana nitrocelulozică are o afinitate ridicată pentru legarea de proteine, în timp ce membrana de nylon are o afinitate ridicată pentru legarea acidului nucleic. Mai mult, interacțiunile hidrofobe și electrostatice leagă macromoleculele la membranele de nitroceluloză, în timp ce interacțiunile ionice, hidrofobe și electrostatice leagă macromoleculele la membranele de nailon
Nitroceluloza și membrana de nylon sunt două tipuri de membrane la care macromoleculele sunt transferate din gel. Cu toate acestea, membranele de nitroceluloză pot fi utilizate pentru a lega ADN și ARN, de asemenea.
Domenii cheie acoperite
1. Ce este o membrană de nitroceluloză
- Definiție, structură, mecanism de legare, avantaje
2. Ce este o membrană din nailon
- Definiție, structură, mecanism de legare, avantaje
3. Care sunt asemănările dintre nitroceluloză și membrana de nailon
- Schița caracteristicilor comune
4. Care este diferența dintre nitroceluloză și membrana de nailon
- Compararea diferențelor cheie
Termeni cheie
Afinitate, Biodyne A, Biodyne B, nitroceluloză, acizi nucleici, nailon, dimensiunea porilor, proteine
Ce este o membrană de nitroceluloză
Membrana de nitroceluloză este o matrice comună utilizată în Western blot datorită afinității ridicate de legare a proteinei. Cu toate acestea, acesta poate fi utilizat pentru a detecta acizii nucleici în afară de proteine imobilizate și glicoproteine. Imobilizarea macromoleculelor are loc în principal prin interacțiuni hidrofobe. Legăturile de hidrogen se formează, de asemenea, între grupările nitro ale membranei și catenele laterale ale aminoacidelor din proteine. Protecția imobilizării va fi ridicată în concentrațiile mari de sare și metanol scăzute.
Figura 1: Principiul blotului
Membranele de nitroceluloză sunt disponibile în forme 100% pure de nitroceluloză cu o suprafață mare, uniformă. Pre-dimensiunile disponibile sunt de 0,2 μm și de 0,45 μm. Mărimea porilor mici este mai bună pentru legarea cu proteine mici (<14 kDa). The binding and retaining capacity of proteins is 80-250 μg/cm2. Membranele pre-asamblate sunt gata de utilizare. Unul dintre principalele avantaje ale membranelor de nitroceluloză este fundalul foarte scăzut, deoarece poate fi ușor blocat. Membranele de nitroceluloză suportate pot fi dezbrăcate și reprobate.
Ce este o membrană din nailon
Nylon membrana este o matrice pe scară largă utilizate pentru legarea de acizi nucleici. Membranele de nylon sunt mecanic puternice decât membranele de nitroceluloză. Cele două tipuri principale de membrane de nailon utilizate în blotting sunt Biodyne A și Biodyne B. Dimensiunea porilor la ambele tipuri este de 0,45 μm. Ele sunt rezistente la căldură și solvenți. De asemenea, nu se vor micsora, se vor sparge sau nu se vor rupe. Ambele dau un fundal scăzut decât membranele de nitroceluloză.
Figura 2: Membrană cu blot sudic
- Biodyne A este alcătuită din nailon nemodificat 66. Sensibilitatea ridicată și rezoluția excelentă sunt avantajele produsului Biodyne A. Deoarece Biodyne A conține atât încărcături pozitive cât și negative, acesta poate fi utilizat pentru a lega multe tipuri de macromolecule.
- Biodyne B este alcătuit din nailon 66 încărcat pozitiv. De aceea, el are o capacitate de legare excelentă pentru acizi nucleici încărcați negativ cum ar fi ADN și ARN.
Asemănări între nitroceluloză și membrană de nailon
- Membranele de nitroceluloză și nailon sunt două tipuri de membrane utilizate pentru a transfera macromolecule din gel în tehnici de blot.
- Acestea permit detectarea macromoleculelor pe membrană.
- Ambele tipuri de membrane pot fi utilizate pentru a transfera acizii nucleici.
- Ele pot fi dezbrăcate și reprobate.
Diferența dintre nitroceluloză și membrana de nailon
Definiție
Membrana de nitroceluloză se referă la o membrană lipicioasă utilizată pentru imobilizarea acizilor nucleici și a proteinelor în blotting, în timp ce membrana de nylon se referă la un tip de membrană cu rezistență ridicată și rezistență la căldură utilizată pentru imobilizarea macromoleculelor.
Alcătuit din
Membranele de nitroceluloză sunt formate din celuloză nitratată, în timp ce membranele de nylon sunt formate din nailon Biodyne A și Biodyne B încărcat nemodificat sau pozitiv.
Dimensiunea porilor
Mărimile de pori ale membranelor de nitroceluloză sunt de 0,2 μm și de 0,45 μm, în timp ce dimensiunea porilor membranelor de nailon este de 0,45 μm.
Putere
Membranele de nitroceluloză sunt fragile și, prin urmare, nu pot fi refolosite, în timp ce membranele de nailon sunt mecanic puternice.
Metoda de transfer
Transferul electroforetic este utilizat în principal în transferul proteinelor pe membranele nitrocelulozice, în timp ce transferul capilar este practica obișnuită cu membranele de nailon.
Afinitate
Membranele de nitroceluloză au o afinitate ridicată la proteine, în timp ce membranele de nylon au afinitate ridicată la acizii nucleici. Membranele de nitroceluloză pot fi, de asemenea, utilizate pentru acizi nucleici.
sugativă
Membranele de nitroceluloză sunt mai bune pentru blotarea Western, în timp ce membranele de nylon sunt mai bune pentru bloturile de sud și de nord.
Interacțiuni de legare
Interacțiunile hidrofobe și electrostatice leagă macromoleculele la membranele nitrocelulozice, în timp ce interacțiunile ionice, hidrofobe și electrostatice leagă macromoleculele de membranele nailonului.
Capacitatea de legare a proteinelor
Capacitatea de legare la proteine a membranei nitrocelulozice este de 80-250 μg / cm2 în timp ce capacitatea de legare a proteinelor din membrana de nylon este de 150-200 μg / cm2.
Concluzie
Membrana de nitroceluloză este o membrană fragilă folosită în principal pentru a imobiliza proteina în Western blotting, în timp ce membrana de nylon este o membrană puternică utilizată în principal pentru a imobiliza acizii nucleici. Membranele de nitroceluloză leagă moleculele prin interacțiuni hidrofobe, în timp ce membranele nailonului leagă moleculele prin interacțiuni electrostatice. Prin urmare, principala diferență între membrana nitrocelulozei și membrana de nylon este afinitatea.
Referinţă:
1. "Membranele de nitroceluloză pentru blotarea Western Thermo Fisher Scientific - LK. "Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, disponibil aici
2. "Membrana de nailon Biodyne A, 0,45 m, 8 cm x 12 cm" Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, disponibil aici
3. "Membrana de nailon Biodyne B, 0,45 m, 8 cm x 12 cm" Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, disponibil aici
Datorită fotografiei:
1. "Biologie biologică" de Gbdivers - lucrare proprie (CC BY-SA 3.0) prin Wikimedia Commons
2. "Membrană cu blot sudic" de Bojan Žunar - Lucrări proprii (CC BY-SA 4.0) prin Wikimedia Commons
