Diferența dintre pagina SDS și pagina nativă
Share
Diferența cheie - pagina SDS vs nativ Pagină
SDS și pagina nativă sunt două tipuri de tehnici de electroforeză pe gel de poliacrilamidă utilizate în biologie moleculară. diferența cheie între pagina SDS și pagina nativă este tipul de gel de poliacrilamidă utilizat. În pagina SDS se folosește un gel de denaturare, prin urmare, moleculele sunt separate pe baza greutății lor moleculare. În contrast, în Pagina Nativă, se utilizează geluri non-denaturare. Prin urmare, moleculele sunt separate pe baza mărimii, încărcării și formei lor.
Electroforeza gelului electrochimic (Page) utilizează un gel obținut prin polimerizarea monomerilor de acrilamidă cu metilen bisacrilamidă. Poliacrilamida este mai stabilă și mai caldă decât agaroza. Gelurile de poliacrilamidă au o dimensiune a porilor mai mică, care permite separarea eficientă a proteinelor. Există două tipuri principale de setări ale paginii, și anume Pagina SDS și Pagina Nativă. Pagina SDS sau Electroforeza pe gel de poliacrilamidă de sodiu și dodecil sulfat separă proteinele pe baza greutății lor moleculare. Gelurile de denaturare sunt utilizate în pagina SDS. Pagina Nativă utilizează geluri nedenaturate și separă proteinele în funcție de mărime, încărcare și formă (conformație 3D).
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Ce este SDS pagina
3. Ce este Pagina Nativă
4. Asemănări între pagina SDS și pagina nativă
5. Comparație de la o parte la alta - Pagină SDS versus pagină nativă în formă tabelară
6. rezumat
Ce este SDS pagina?
Pagina SDS este cea mai comună tehnică electroforetică folosită pentru separarea proteinelor pe baza greutății lor moleculare. Gelul este obținut prin adăugarea de SDS (dodecil sulfat de sodiu), care este un detergent. SDS protejează proteinele în monomeri. SDS este un detergent anionic. Prin urmare, aceasta adaugă o încărcare negativă netă proteinelor într-un domeniu de pH larg. Atunci când încărcarea negativă netă este impărtată asupra moleculelor de proteine, datorită variației sarcinii, structurile complexe sunt defalcate. Datorită încărcării negative, proteinele atrag spre capătul pozitiv. Astfel, moleculele cu greutate moleculară mai mică se deplasează mai repede pe matricea de gel și pot fi observate aproape de anod, în timp ce proteinele cu greutate moleculară mai mare sunt observate mai aproape de godeuri.
Figura 01: Pagina SDS
Legarea SDS la catena polipeptidică este proporțională cu masa moleculară relativă. Prin urmare, masa moleculară poate fi de asemenea determinată prin SDS Page. Colorarea gelurilor de pagină SDS se face prin colorarea cu albastru de bromofenol. Aplicațiile paginii SDS se extind într-o măsură mai mare în cazul în care pot fi utilizate pentru a estima masa moleculară relativă și a determina abundența relativă a proteinelor într-un amestec de proteine. Pagina SDS poate fi, de asemenea, utilizată pentru a determina distribuția proteinei într-un amestec de proteine. Pagina SDS este aplicată și pentru purificarea și evaluarea proteinelor. Acesta este folosit ca o procedură preliminară pentru Western blotting și hibridizare, care, la rândul său, este utilizată pentru cartografierea și identificarea proteinelor.
Ce este Pagina Nativă?
Electroforeza pe gel de poliacrilamidă nativă (Pagina Nativă) utilizează un gel nedenaturat. Prin urmare, SDS sau orice alt agent de denaturare nu se adaugă la matricea de gel. În pagina nativă, separarea proteinelor se bazează pe sarcina și dimensiunea proteinei. Prin urmare, mobilitatea proteinei depinde de încărcarea și dimensiunea proteinei.
Încărcarea proteinei depinde de lanțurile laterale ale aminoacizilor. Dacă lanțurile laterale sunt încărcate negativ, proteina va primi o încărcare negativă globală și invers. Proteinele păstrează o conformație 3D datorită plierei care are loc. Rezultatele de pliere din mai multe tipuri de legături în proteine, cum ar fi legături disulfidice, interacțiuni hidrofobe și legături de hidrogen. Prin urmare, dacă pagina nativă este transportată la un pH neutru, proteinele vor fi separate în funcție de forma moleculară a proteinei. Prin urmare, Pagina Nativă poate fi utilizată ca o tehnică sensibilă pentru a detecta modificarea încărcării sau conformația proteinei.
Principalul avantaj al paginii native este că proteina folosită pentru analiza paginii poate fi recuperată în starea inițială după analiza paginii, deoarece proteina nu este perturbată în timpul procesului. Pagina Nativă este o tehnică relativ înaltă, iar stabilitatea proteinei este mărită.
Figura 02: Pagina nativă
După terminarea ciclului de gel, gelul de pagină nativă poate fi văzut prin colorare cu albastru de bromfenol sau orice alt reactiv adecvat de colorare. Aplicațiile Paginii Native includ separarea proteinelor acide, inclusiv a glicoproteinelor, cum ar fi eritropoietina recombinantă umană sau identificarea proteinelor prezente în albumina serică bovină (BSA).
Care sunt asemănările dintre pagina SDS și pagina nativă?
- Ambele sisteme SDS și sistemele native utilizează gelul de poliacrilamidă ca matrice a gelului.
- Ambele sunt utilizate pentru separarea și identificarea proteinelor.
- Ambele utilizează mobilitate electroforetică pentru a separa compușii.
- Ambele pot fi realizate într-o manieră verticală sau orizontală (cea mai mare parte realizată ca setări de pagini verticale, deoarece lungimea de rulare este mai mare).
- Aparatura de electroforeză incluzând rezervorul de gel, piepteni, alimentarea cu energie este necesară pentru funcționarea ambelor tehnici.
- Vizualizarea gelului se poate face prin metode de colorare în ambele tehnici.
Care este diferența dintre pagina SDS și pagina nativă?
Pagină SDS versus Pagina Nativă | |
| Pagina SDS sau sulfatul de dodecil de sodiu Pagina separă proteinele pe baza greutății lor moleculare și utilizează un gel de denaturare. | Pagina Nativă utilizează geluri nedenaturate și separă proteinele în funcție de mărime, încărcare și formă (conformație 3D). |
| Tip de gel | |
| Un gel de denaturare este utilizat în pagina SDS. | Un gel nedenaturativ este utilizat în pagina nativă. |
| Prezența SDS | |
| SDS este prezent ca detergent pentru a imprima o încărcătură negativă pe eșantion în pagina SDS. | SDS nu este prezent în pagina nativă. |
| Separarea bazei | |
| Separarea proteinelor depinde de greutatea moleculară a proteinei din pagina SDS. | Separarea depinde de dimensiunea și forma moleculei de proteine din pagina nativă. |
| Stabilitatea proteinei | |
| Stabilitatea proteinei este scăzută în pagina SDS. | Stabilitatea proteinei este ridicată în pagina nativă. |
| Recuperarea proteinei originale | |
| Nu este posibil deoarece este denaturat în pagina SDS. | Posibilă în pagina nativă. |
rezumat - SDS Pagina vs Nativ Pagină
Pagina SDS și Pagina Nativă sunt două tipuri de tehnici de electroforeză pe bază de poliacrilamidă utilizate pentru separarea proteinelor. Pagina SDS este tratată cu un detergent denumit SDS. SDS atribuie o încărcătură negativă globală proteinei, care duce apoi la denaturarea proteinei. Prin urmare, proteinele sunt separate pe baza greutății lor moleculare. În contrast, tehnica Paginii Native nu folosește niciun agent de denaturare. Astfel, proteinele sunt fie separate pe baza dimensiunii lor, fie a formei. Aceasta este diferența dintre pagina SDS și pagina nativă.
Referinţă:
1. "Principiul și metoda electroforezei gelului poliacrilamidic (SDS-PAGE)" Principiul și metoda electroforezei gelului poliacrilamidic (SDS-PAGE) | MBL Life Sience - ASIA-. Disponibil aici
2. "Geluri native". Laboratoarele de proteine aliante | Servicii de caracterizare biofizică. Disponibil aici
Datorită fotografiei:
1.SDS-PAGE Electroforeza prin Bensaccount la Wikipedia în engleză, (CC BY 3.0) prin intermediul Commons Wikimedia
2. "Lasati o proba intr-o electroforeza de gel de poliacrilamida" Blay Nemec din Ljubljana, Slovenia (CC BY-SA 2.0) prin intermediul Commons Wikimedia
