Diferența dintre paginile SDS și Western Blot

Diferența cheie - Pagina SDS vs Western Blot
 

Western blotting este o tehnică care detectează o proteină specifică dintr-o probă de proteine. Această tehnică se realizează prin mai multe etape cheie: electroforeza pe gel, blot și hibridizare. Electroforeza pe gel de dodecil sulfat de poliacrilamidă de sodiu (SDS Page) este un fel de tehnică de electroforeză pe gel care se utilizează pentru a separa proteinele în funcție de dimensiunile lor (greutăți moleculare). Blocul Western este o foaie specială a unei membrane blotting care este utilizată pentru a transfera același model de proteine ​​pe pagina SDS. Diferența cheie dintre SDS Page și Western blot este aceea Pagina SDS permite separarea proteinelor într-un amestec in timp ce Western blot permite detectarea și cuantificarea unei proteine ​​specifice dintr-un amestec. Ambele sunt utile în studiile de analiză a proteinelor.

CUPRINS
1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Ce este SDS pagina
3. Ce este Western Blot
4. Comparație de la o parte la alta - SDS Page vs. Western Blot
5. rezumat

Ce este SDS pagina?

Pagina SDS este o tehnică de electroforeză pe gel folosită pentru separarea proteinelor. Este frecvent utilizat în biochimie, genetică, medicină legală și biologie moleculară. Odată ce proteinele sunt extrase din eșantion, acestea se execută pe un gel format din SDS și poliacrilamidă. SDS este un detergent anionic care este utilizat pentru a lineariza proteinele (proteine ​​denaturate) și pentru a imprima o sarcină negativă proteinelor linearizate proporționale cu masa lor moleculară. Poliacrilamida devine suportul solid pentru gel. Proteinele denaturate care sunt încărcate negativ migrează către capătul pozitiv al aparatului prin gel. În funcție de dimensiunile proteinelor, vitezele de migrare diferă între proteine ​​și are loc separarea. Prin urmare, pagina SDS este utilă pentru separarea proteinelor individuale pe baza dimensiunilor acestora.

Prepararea gelului de poliacrilamidă pentru fracționarea proteinelor este o etapă crucială în SDS. Concentrația corectă a poliacrilamidei și tipul agentului de reticulare utilizate afectează puternic proprietățile fizice ale gelului, ceea ce face separarea efectivă a diferitelor proteine. Mărimile de pori ale gelului trebuie gestionate corespunzător pentru o separare eficientă. Cu toate acestea, SDS Page este considerată o tehnică de separare a proteinelor de înaltă rezoluție.

Tehnica SDS a paginii are o limitare majoră în analiza proteinelor. Deoarece SDS denaturează proteinele înainte de separare, nu permite detectarea activității enzimatice, a interacțiunilor de legare a proteinelor, a cofactorilor de proteine ​​etc..

Figura 01: Pagina SDS

Ce este Western Blot?

Tehnica Western Blotting permite detectarea unei proteine ​​specifice dintr-un amestec de proteine ​​și măsurarea cantității și a greutății moleculare a proteinei. Western blot este membrana folosită în timpul procedurii de blotting pentru a obține imaginea în oglindă a modelelor de proteine ​​din gelul SDS-poliacrilamidă. Membrana utilizată pentru blotarea western este în mare parte alcătuită din nitroceluloză sau difluorură de poliviniliden (PVDF). Membrana cu proteina transferată poate fi utilizată pentru a identifica proteina dorită. Aceasta necesită anticorpi de înaltă calitate pentru detectarea proteinei dorite prin hibridizare. Anticorpul se leagă la antigenul său specific și relevă prezența antigenului dorit care este o proteină.

Transferul proteinelor din gelul de poliacrilamidă SDS în blotul western se efectuează prin electroblotting. Este o metodă eficientă și rapidă care determină proteinele să se electroforezeze din gel și să treacă pe membrana de nitroceluloză (Western blot).

Figura 02: Western Blot

Care este diferența dintre pagina SDS și Western Blot?

Pagina SDS vs Western Blot
SDS Page este o tehnică de electroforeză în gel.	Western blot este o tehnică care se efectuează pe o membrană pentru a detecta o proteină specifică dintr-un amestec.
Utilizare
Pagina SDS permite separarea proteinelor în funcție de dimensiunile lor.	Blocul Western permite transferul de proteine ​​pe gelul paginii SDS fără a schimba modelul și permite hibridizarea cu anticorpi specifici.
Dezavantaje
Denaturarea proteinei, costul ridicat și prezența substanțelor chimice neurotoxinice sunt dezavantajele acestei tehnici.	Această tehnică necesită mult timp și necesită condiții bine controlate, personale și specifice.

Rezumat - Pagina SDS vs Western Blot

Pagina SDS și Western blot sunt două metode implicate în analiza proteinelor. Pagina SDS permite o separare ușoară a proteinelor pe un gel în funcție de greutatea lor moleculară. Western blot-ul ajută la confirmarea prezenței și cantității unei proteine ​​specifice prin hibridizarea cu anticorpi specifici. Aceasta este diferența dintre paginile SDS și Western blot.

Referințe:
1. Blancher, C. și A. Jones. "SDS-PAGE și Western Blotting Techniques". Metode în medicina moleculară. Biblioteca Națională de Medicină din S.U.A., n.d. Web. 27 martie 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig și David H. Petering. "SDS-PAGE nativ: Separarea electroforetică de înaltă rezoluție a proteinelor cu reținerea proprietăților native, inclusiv ionii metalici legați" Metallomics: știință biometală integrată. Biblioteca Națională de Medicină din S.U.A., mai 2014. Web. 27 martie 2017.

Datorită fotografiei:
1. "Electroforeza SDS-PAGE" Prin Bensaccount la Wikipedia în engleză (CC BY 3.0) prin intermediul Commons Wikimedia
2. "Western blot 114A" de Amanthabagdon - Lucrare proprie (Public Domain) prin Commons Wikimedia