Diferența dintre GFP și PGFP
Share
principala diferență între GFP și PGPF este faptul că GFP (reprezintă proteina verde fluorescentă) este o proteină care prezintă fluorescență verde strălucitoare atunci când este expusă la lumină albastră, în timp ce EGFP (reprezintă proteina de fluorescență verde îmbunătățită) prezintă o fluorescență mai puternică decât GFP. Mai mult, o altă diferență importantă între GFP și EGFP este că GFP este o proteină de tip sălbatic izolată de meduze, Aequorea victoria. Dar, EGFP este o varianta ingineria de tip sălbatic original.
GFP și EGFP sunt două tipuri de proteine care servesc ca cromofori interni. Nu necesită enzime / substraturi accesorii, cofactori sau produse genetice pentru a-și expune culoarea. Prin urmare, ambele sunt folosite ca reporter al expresiei genei în biologia moleculară.
Domenii cheie acoperite
1. Ce este GFP
- Definiție, structură, importanță
2. Ce este EGFP
- Definiție, structură, importanță
3. Care sunt asemănările dintre GFP și EGFP
- Schița caracteristicilor comune
4. Care este diferența dintre GFP și EGFP
- Compararea diferențelor cheie
Termeni cheie
Cromofor, EGFP, GFP, fluorescență verde, proteină de tip sălbatic
Ce este GFP
GFP (proteina fluorescentă verde) este o proteină care strălucește verde sub lumină albastră sau UV. Se întâmplă în mod natural în meduze, Aequorea Victoria. GFP este alcătuit din 238 de aminoacizi. Dimensiunea GFP este de 26,9 kDa. GFP este un instrument puternic în biologia moleculară, datorită fluorescenței sale intrinseci, fără nicio moleculă accesorie. Fluorescența se datorează rearanjării covalente a aminoacizilor contiguați ai proteinei. După plierea proteinei, atomii principali ai lanțului, Ser65, Tyr66 și Gly67 formează planul de mare conjugare p-hidroxibenzilidenimidazolinonă în prezența O2. Studiile privind structura cristalină arată că împachetarea cromoforului în interiorul nucleului structurii β-baril al moleculei îl protejează de călcarea prin oxigen paramagnetic, dipoli de apă sau izomerizare cis-trans. În plus, interacțiunile necovalente ale cromoforului cu moleculele învecinate sporesc proprietățile sale spectrale.
Figura 1: Reprezentarea panglică a GFP și a fluoroforului
GFP poate fi introdus într-un organism în timpul modificărilor transgenice. Poate fi menținută și prin generații. Dezavantajul major al GFP de tip sălbatic este eficiența redusă a proteinei în imagistica celulară cauzată de pliarea cu eficiență scăzută la temperaturi fiziologice, cum ar fi 37 ° C, prin scăderea semnalului fluorescent. De asemenea, rata de maturare a GFP în interiorul celulei gazdă este lentă în timp ce tinde să agregeze. Două vârfuri de excitație pot fi observate datorită prezenței a două forme diferite ale cromoforului. Cu toate acestea, ingineria proteinelor a rezolvat majoritatea problemelor prin introducerea de forme variate ale GFP de tip sălbatic.
Ce este EGFP
EGFP (proteina de fluorescență verde îmbunătățită) este o variantă a GFP de tip sălbatic cu emisie de intensitate mai mare în raport cu GFP. Este una dintre primele și cele mai importante variante ale GFP. Cele două mutații, F64L și S65T, generează EGFP cu o eficiență de pliere mai mare la 37 ° C. Interesant este faptul că EGFP are un singur vârf de excitație la ~ 490 nm datorită suprimării vârfului de 395 nm prin S65T, deoarece acesta modulează starea ionizată a Glu222 din apropiere. Pe de altă parte, F64L mărește eficiența pliere la 37 ° C. Este important faptul că secvența de codoni ai EGFP este optimizată pentru exprimarea în celulele de mamifere.
Figura 2: Expresia EGFP
Asemănări între GFP și FEPA
- GFP și EGFP sunt proteine care prezintă fluorescență verde strălucitoare atunci când sunt expuse la lumină albastră.
- Ambele pot servi drept cromofor intern fără enzime / substraturi accesorii, cofactor sau produse genetice pentru a-și exprima culoarea.
- Ele formează un cilindru clasic β-baril cu cromoforul, care conține helix care trece prin miezul structurii.
- Ele sunt folosite ca reporter de expresie în biologia moleculară.
Diferența dintre GFP și PGFP
Definiție
GFP: O proteină de tip sălbatic care prezintă fluorescență verde sub lumină albastră sau UV și apare în mod natural în meduze, Aequorea Victoria
EGFP: O variantă a GFP de tip sălbatic cu emisie cu intensitate mai mare în raport cu GFP
Stăpâne pentru
GFP: Proteină verde fluorescentă
EGFP: Enhanced proteine fluorescente verde
Origine
GFP: Genul mai sălbatic
EGFP: mutant
64lea Amino acid
GFP: fenilalanina
EGFP: leucină
65lea Amino acid
GFP: Serina
EGFP: Treonină
Luminozitatea culorii
GFP: Verde deschis
EGFP: Mai verde
Vârfurile de excitare
GFP: Două vârfuri (395 nm și 490 nm)
EGFP: Singurul vârf (490 nm)
Eficiență pliantă la 37 ° C
GFP: Scăzut
EGFP: Înalt
Concluzie
GFP este proteina de tip sălbatic care prezintă fluorescență verde strălucitoare atunci când este expusă la lumină albastră sau UV. EGFP este o variantă a GFP care prezintă fluorescență cu intensitate mai mare comparativ cu GFP. Astfel, diferența principală dintre GFP și EGFP este intensitatea fluorescenței verde pe care fiecare proteină o emit.
Referinţă:
1. Arpino, James A.J., și colab. "Structura cristalină a proteinelor fluorescente verde îmbunătățite la rezoluția de 1,35 Å dezvăluie conformări alternative pentru Glu222." PLOS Medicină, Biblioteca publică a științei, journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0047132.
Datorită fotografiei:
1. "Gfp și fluorofor" De Raymond Keller (Raymond Keller (talk)), sub auspiciile proteinei cristaline. - Activitate proprie (Domeniul Public) prin Wikimedia Commons
2. "Fgams ppat egfp puncta" de Zhao A, Tsechansky M, Swaminathan J, Cook L., Ellington AD, și colab. (2013) Enzimele biosintetice purin transfectate tranzitoriu formează corpuri de stres. PLoS ONE 8 (2): e56203. doi: 10.1371 / journal.pone.0056203 (CC BY 3.0) prin intermediul Wikimedia Commons
