Diferența între faza inversă și cromatografia de interacțiune hidrofobă
Share
principala diferență între cromatografia cu interacțiune în fază inversă și hidrofobă este faptul că cromatografia cu fază inversă (RPC) utilizează un mediu mai hidrofob, ceea ce conduce la interacțiuni mai puternice, în timp ce cromatografia cu interacțiune hidrofobă (HIC) utilizează un mediu mai puțin hidrofob în comparație cu mediul în cromatografia cu fază inversă.
Cromatografia cu fază inversă și cromatografia cu interacțiune hidrofobă sunt două tehnici cromatografice care depind de interacțiunile dintre suprafețele hidrofobe ale unui mediu de cromatografie și plasturii hidrofobi de pe suprafața biomoleculelor.
Domenii cheie acoperite
1. Ce este cromatografia în fază inversă
- Definiție, pași, aplicații
2. Ce este cromatografia de interacțiune hidrofobă
- Definiție, pași, aplicații
3. Care sunt asemănările dintre cromatografia în fază inversă și cromatografia de interacțiune hidrofobă
- Schița caracteristicilor comune
4. Care este diferența dintre cromatografia de fază inversă și cromatografia de interacțiune hidrofobă
- Compararea diferențelor cheie
Termeni cheie
Cromatografie de interacțiune hidrofobă, HIC, mediu, cromatografie în fază inversă, RPC
Ce este cromatografia în fază inversă
Cromatografia în fază inversă (RPC) este o tehnică cromatografică utilizată în purificarea și analizarea biomoleculelor, cum ar fi proteine, peptide și oligonucleotide. Oferă o separare de înaltă rezoluție și este ideal pentru cartografierea peptidelor și verificarea purității. RPC este mai des folosit în lustruirea finală a peptidelor și a oligonucleotidelor.
Două tipuri principale de medii hidrofobe pot fi utilizate ca fază staționară: perle de silice acoperite cu lanțuri de carbon sau polimeri hidrofobi goi. O coloană este împachetată cu mediul hidrofob într-o formă de pat ambalat pe care se aplică eșantionul. Un agent de perechi de ioni, cum ar fi acidul trifluoracetic (TFA), poate fi adăugat la faza mobilă pentru a spori formarea interacțiunilor hidrofobe. Un modificator organic, cum ar fi 5% acetonitril, este utilizat la început și eluția poate fi inițiată cu creșterea procentului de acetonitril.
Figura 1: Teoria cromatografiei în fază inversă
Biomoleculele care sunt mai puțin hidrofobe / mai polare vor elua mai întâi, în timp ce moleculele mai hidrofobe se vor elua mai târziu. RPC este tehnica cromatografică cu cea mai mare rezoluție.
Ce este cromatografia de interacțiune hidrofobă
Hidrofobia de cromatografie cu interacțiune (HIC) este o altă tehnică utilizată în separarea biomoleculelor bazată pe hidrofobicitate în condiții moderate. Este o tehnică ideală pentru purificarea proteinelor când probele trebuie supuse precipitării sulfatului de amoniu în concentrația inițială a probei și curățare. Nivelul ridicat de sare în timpul precipitării cu sulfat de amoniu crește interacțiunea dintre componentele hidrofobe.
Figura 2: Efectul concentrației mari de săruri asupra interacțiunilor hidrofobe
Mediul hidrofob al HIC constă într-o matrice inertă de particule sferice acoperite cu liganzi conținând grupări alchil sau arii. Interacțiunile hidrofobe se produc sub concentrații moderat de sare (de obicei 1-2 M sulfat de amoniu sau 3 M NaCI). Tamponul de pornire asigură legarea proteinelor de interes pentru mediu în timpul spălării impurităților. Tamponul de eluție conține o concentrație scăzută de sare, slăbind interacțiunea dintre proteine și faza staționară.
Asemănări între cromatografia în fază inversă și cromatografia de interacțiune hidrofobă
- Faza inversă și cromatografia cu interacțiune hidrofobă sunt două tehnici utilizate în separarea biomoleculelor pe baza hidrofobiei lor.
- Faza mobilă a ambelor tehnici este fie apă, fie un solvent organic.
- Ei folosesc coloanele cu paturi aglomerate.
- Tampon de pornire asigură legarea moleculelor dorite de coloană.
- Moleculele cu cea mai mică hidrofobicitate se pot elua mai întâi, în timp ce mai multe molecule hidrofobe se pot elua mai târziu.
- Etapa finală de spălare eluie moleculele cele mai strâns legate.
- Rezoluția ambelor tehnici este o combinație a selectivității (gradul de separare între vârfuri), eficiența (capacitatea de a produce vârfuri înguste și simetrice) ale tehnicii, masa probei și timpul de retenție.
Diferența dintre cromatografia în fază inversă și cromatografia de interacțiune hidrofobă
Definiție
Cromatografia în fază inversă (RPC) se referă la tehnica de separare cu cea mai mare rezoluție bazată pe hidrofobicitatea moleculelor într-un amestec, în timp ce cromatografia cu interacțiune hidrofobă (HIC) se referă la un tip de tehnică de separare bazată pe hidrofobicitate, dar operează în condiții relativ ușoare.
Hidrofobicitatea
RPC funcționează în condiții mai hidrofobe, în timp ce HIC operează în condiții relativ ușoare hidrofobe.
interacţiuni
Cromatografia cu fază inversă conduce la interacțiuni mai puternice între molecule și faza staționară care trebuie inversată în timpul eluției cu un modificator organic, în timp ce HIC conduce la interacțiuni moderat ridicate între faza staționară și moleculele.
Medii hidrofobe
RPC folosește fie bile de silice acoperite cu catene de carbon, fie polimeri hidrofobi goi, în timp ce HIC utilizează o matrice inertă de particule sferice acoperite cu liganzi conținând grupări alchil sau arii.
Porniți tamponul
Tamponul de pornire în RPC utilizează acid trifluoracetic (TFA), în timp ce tamponul de pornire al HIC utilizează concentrații moderat de sare ridicate.
Eluarea
Procentul crescut de acetonitril începe eluția în RPC, în timp ce concentrația de sare descrescătoare începe eluția în HIC.
Rezoluţie
Cromatografia cu fază inversată este tehnica cromatografică cu cea mai mare rezoluție, în timp ce rezoluția HIC este scăzută în comparație cu RPC.
Aplicații
RPC este utilizat în separarea proteinelor, peptidelor și oligonucleotidelor în timp ce HIC este utilizat în principal în purificarea proteinelor.
Concluzie
Cromatografia cu fază inversă este tehnica cromatografică cu cea mai mare rezoluție, care funcționează în condiții foarte hidrofobe. Dar, HIC operează în condiții moderate hidrofobe. RPC și HIC sunt cele două tipuri de tehnici de separare bazate pe hidrofobicitate. Principala diferență dintre RPC și HIC este gradul de hidrofobicitate utilizat în fiecare tehnică.
Referinţă:
1. Interacțiunea hidrofobă și cromatografia fazei inversate: Principii și metode. GE Healthcare, 2006. Disponibil aici
Datorită fotografiei:
1. "Schema de eluție a gradientului în fază inversă" de Nategm - Muncă proprie (CC BY-SA 4.0) prin Wikimedia Commons
2. "Hicsalt" De la Daliak la Wikibooks de la Wikipedia, enciclopedia liberă - Traducere din en.wikibooks de la Commons. (Domeniul Public) prin Wikimedia
