Cum funcționează tripsina în cultura celulară
Share
Trypsina este o serin protează care desprinde reziduurile de lizină și arginină la capătul C al peptidelor. Este cea mai răspândită enzimă din cultura celulară pentru a elibera celulele aderente de pe suprafețele vaselor de cultură. Trypsina este ușor tolerată de majoritatea tipurilor de celule cultivate în culturi. Activitatea sa poate fi neutralizată cu ușurință prin adăugarea de ser în mediul de cultură. Aceste două caracteristici ale tripsinei facilitează utilizarea lor în culturile celulare. În general, tripsina este adăugată la culturile celulare cu EDTA. Rolul tripsinei în culturile celulare este descris în acest articol.
Domenii cheie acoperite
1. Ce este Trypsin
- Definiție, Funcții, Funcție
2. Cum funcționează tripsina în cultura celulară
- Rolul tripsinei în cultura celulară
Termeni cheie: proteine adezive, adeziune celulară, enzime digestive, tripsină, trypsinizare
Ce este Trypsin
Trypsina este o enzimă digestivă care descompune proteinele din sistemul digestiv al multor vertebrate. Se găsește în sucul pancreatic. Trypsina descompune reziduurile de lizină și arginină ale carboxi terminale ale peptidelor. Cu toate acestea, nu le scindează atunci când acești doi aminoacizi sunt urmăriți de praline. Activitatea tripsinei este utilizată în multe procese biotehnologice, iar acțiunea tripsinei este cunoscută ca tripsinizare sau proteoliza tripsinei. Structura cristalină a tripsinei este prezentată în figura 1.
Figura 1: Trypsină
PH-ul optim pentru acțiunea tripsinei este de 7,6-8,5. În general, roșu fenol este utilizat în încercările de tripsină pentru a monitoriza domeniul de pH de mai sus. Fenolul roșu dă o culoare roz la acest interval de pH. Analizele tripsinei se efectuează pe gheață uscată.
Cum funcționează tripsina în cultura celulară
Proteinele de pe membrana plasmatică sunt responsabile pentru o mare varietate de funcții care sunt esențiale pentru menținerea activității fiziologice normale a celulei. Unele proteine cu membrană plasmatică, cum ar fi familiile de cadherină, sunt proteine adezive care servesc drept ancore, care leagă proteinele citoscheletului de matricea extracelulară. Acest lucru ajută la aderarea celulelor și migrarea celulelor. Proteinele adezive din membrana plasmatică sunt prezentate în figura 2.
Figura 2: Proteine adezive celulare
În culturi celulare, tripsina poate fi adăugată în mediu pentru a elibera celulele aderente de suprafața vasului de cultură prin digerarea proteinelor adezive. Trypsina eliberează de asemenea celule din agregate prin digestia proteinelor adezive. EDTA este, de asemenea, adăugat la culturile celulare împreună cu tripsina pentru chelarea ionilor divalenți în mediu. Ionii de calciu și magneziu pot inhiba acțiunea tripsinei. În cele din urmă, tripsina ajută la obținerea de celule individuale din culturile celulare, facilitând prelucrarea în aval a celulelor.
Concluzie
Trypsina este o enzimă fotolitice care digeră peptide. Trypsina este folosită pe scară largă în cultura celulară pentru a obține celule individuale, deoarece tripsina digeră proteinele adezive și eliberează celulele în mediu.
Referinţă:
1. "Alterarea proteomului indusă de tripsină în timpul subculturii celulare în celulele de mamifere". Oficial al științei biomedicale, BioMed Central, 11 mai 2010, disponibil aici.
Datorită fotografiei:
1. "1UTN" Utilizator: DrKjaergaard - Lucrare proprie: Din fișierul PDU 1UTN. Creat cu PyMol (Public Domain) prin Wikimedia Commons
2. "Aderența celulară" de către ZabMilenko la Wikipedia engleză - Transferat de la en.wikipedia la Commons by Premeditated Chaos folosind CommonsHelper (Public Domain) prin Wikimedia Wikimedia
