De ce se folosește căldura în colorarea endospore
Share
Un procedeu de colorare diferențială este utilizat în colorarea endospori. Verdele malachit este pata principală care pată atât celulele vegetative cât și endosporele din eșantion. Apoi, utilizarea căldurii ajută la penetrarea petei primare în endospore. După decolorare, safraninul pentru contracar este utilizat pentru a pata fundalul.
Două gene patogene cunoscute sub numele de bacil și Clostridium produce endospori inactivi metabolic pentru a rezista la condițiile adverse de mediu. Deoarece endosporele provoacă o serie de boli letale, identificarea acestora este destul de importantă în probele clinice.
Domenii cheie acoperite
1. Ce sunt Endospores?
- Definiție, fapte
2. Ce este colorarea endospore
- Tehnici de colorare endospore
3. De ce se folosește căldura în colorarea endospore
- Utilizarea căldurii
Termeni cheie: endospori, căldură, verde malachit, pori, celule vegetative
Ce sunt Endospores?
Un endoscop este o structură rezistentă produsă de unele gene bacteriene patogene cum ar fi bacil și Clostridium pentru a supraviețui în condiții nefavorabile de mediu. Aceste condiții nefavorabile pot fi căldură, deshidratare, radiații sau substanțe chimice. Procesul de producere a endosporilor din celulele vegetative se numește sporulație. Este posibil să dureze 8-10 ore pentru a finaliza procesul. Endospori pot locui în interiorul celulei bacteriene sau pot exista ca spori liberi. Formarea endosporei este prezentată în figura 1.
Figura 1: Formarea endosporală
Endospori sunt inactivi metabolic sau dormitori. Acestea conțin o cantitate mică de citoplasmă și ADN acoperit de o acoperire protectoare exterioară. Peretele celular constă din acid dipicolinic, dând proprietăți rezistente la căldură endosporei. Endosporele germinează pentru a produce noi organisme atunci când condițiile de mediu devin favorabile. Tratamentul încălzirii umede la 121 ° C timp de 15 minute poate distruge endosporii bacterieni.
Ce este colorarea endospore
Colorarea cu endospore este un proces diferențiat de colorare în care diferite structuri ale specimenului sunt colorate în culori diferite. Acesta permite identificarea endosporilor din celulele vegetative. Procesul standard de colorare cu endospore este tehnica Schaeffer-Dulton. Pata primara in aceasta tehnica este verde malachit, iar contrastainul este safranina.
Schaeffer-Dulton Technique - Procedura
1. După pata pe un slide de microscop, lăsați proba bacteriană să se satureze cu soluția verde de malachit.
2. Apoi, încălziți ușor glisantul timp de 3-5 minute până ce vopseaua începe să se evaporă.
3. Lăsați sliderul să se răcească și spălați-l cu apă pentru decolorare.
4. În cele din urmă, după contracarare, clătiți glisorul.
5. Se usucă la aer și se observă sub microscop.
Aici, endospori sunt colorați în verde cu verde malachit și celulele vegetative sunt colorate în culoare roz cu safranină. Endosporele colorate prin tehnica Schaeffer-Dulton sunt prezentate în figura 2.
Figura 2: Endospori (verde) și celule vgetative (roz)
O tehnică alternativă de colorare endospore poate fi identificată cunoscută sub numele de metoda lui Doner. Endospori vor fi colorați în roșu în această metodă.
De ce se folosește căldura în colorarea endospore
Acoperirea cu ceară de endospori rezistă la colorare. Prin urmare, pata primară trebuie să fie forțată în endospore. Utilizarea căldurii este de a spori penetrarea pata primară în endospore. Diapozitivul cu verde malachit poate fi încălzit până la 3-5 minute. Timpul de încălzire este direct proporțional cu cantitățile de coloranți care pătrund în pereții endospori. Timpii de încălzire mai lungi fac pori pe peretele endospore, facilitând penetrarea mai multor coloranți.
Concluzie
Endospori sunt celulele reproductive ale majorității bacteriilor patogene. Prin urmare, identificarea endosporilor într-o probă este esențială în diagnosticare.
Referinţă:
1. "Colorarea endospore - înțelegerea definițiilor, tehnicilor și procedurilor". MicroscopeMaster, Disponibil aici.
Datorită fotografiei:
1. "Formarea endosporelor" de Farah, Sophia, Alex - Muncă proprie (CC BY-SA 4.0) prin Wikimedia Commons
2. "Bacillus subtilis Spore" De Y tambe (original uploader) - Muncă proprie (CC BY-SA 3.0) prin Wikimedia Commons
